Dissertation Klaus Heitkamp 1999
Dissertation Klaus Heitkamp 1999 Dissertation Klaus Heitkamp 1999
6 Anhang 1696.8 Bestimmung der Trägerbelegung bei der Immobilisierung von Mikroperoxidasemittels der AtomabsorptionsspektrometrieZur Bestimmung der Trägerbelegung mittels der Atomabsorptionsspektrometrie und derStandardadditionsmethode wurde nach beendeter Immobilisierung jeweils eine bestimmteMenge des Reaktionslösung mit 0,05 % Salzsäure auf 25 ml aufgefüllt. 10 ml davon wurdendirekt zur Messung verwendet, weitere 10 ml wurden mit 50 bzw. 100 µl der Standardlösungaufgestockt. Die so vorbereiteten Lösungen wurden an einem Atomabsorptionsspektrometerauf den Eisengehalt hin untersucht (λ = 248,3 nm, Acetylen/Luft-Flamme; Perkin-ElmerIntensitron Multielementlampe Al/Ca/Cu/Fe/Mg/Si/Zn, Lampenstrom 30 mA).Die Berechnung der Konzentration erfolgte nach folgender Gleichung:cx=hxs⋅hx⋅ cs⋅V( Vx+ Vs) − hxVxsGleichung 21c xc sV xV sh xh xs= Konzentration der Probe= Konzentration des Standards= Volumen Probelösung= Volumen zugesetzter Standardlösung= Meßwert der Probe= Meßwert Probe + StandardAus der berechneten Eisenkonzentration der Lösung konnte mit Hilfe der Molmasse derMikroperoxidase (M = 1862 g/mol) und unter Berücksichtigung des Verdünnungsfaktors derEnzymgehalt im Reaktionsansatz nach der Immobilisierung berechnet werden. Bei bekannterMenge der zuvor eingesetzten Aminopropyl-CPG-Beads und der Mikroperoxidase konntedamit die Trägerbelegung in mg MP-11 / 100 mg Beads bestimmt werden. In nachstehenderTabelle sind die Meßergebnisse im einzelnen aufgeführt:
170 6 AnhangBeadsorte 50/63,2 50/78,8 50/99,8 50/125Einwaage MP-11 in mg 10,3 9,9 9,4 9,4c s in mg Fe/l 500 500 500 500V x in ml 10 10 10 10V s in ml 0,05 0,10 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05h x in AU 0,0017 0,006 0,002 0,005 0,002 0,004 0,0033 0,0040h xs in AU 0,0993 0,1717 0,0707 0,0807 0,0953 0,0930 0,1003 0,0957c x in mg Fe/l 0,0433 0,1792 0,0724 0,1643 0,0533 0,1118 0,0855 0,1085c x in mg MP-11/l 1,4405 5,9582 2,409 5,4637 1,7722 3,7165 2,8418 3,6084Verdünnungsfaktor 250 50 50 25 50 25 50 25Konzentration MP-11im Ansatz nach derImmobilisierung in mgMP-11/lAnsatzvolumen nachder Reaktion in mlMenge MP-11 imAnsatz nach derImmobilisierung in mgMenge immobilisierteMP-11 in mgEinwaage Träger inmgBelegung des Trägersin mg MP-11/100 mgCPGmittlere Trägerbelegungin mg MP-11/100mg CPG360,14 297,91 120,44 136,59 88,61 92,91 142,09 90,213,50 3,70 3,35 3,481,80 1,49 0,12 0,14 0,09 0,09 0,49 0,318,50 8,81 9,78 9,76 9,31 9,31 8,91 9,09300,0 303,6 300,0 300,02,83 2,94 3,22 3,22 3,10 3,10 2,97 3,032,88 3,22 3,10 2,99Tabelle 49Bestimmung der Belegung von Aminopropyl-CPG-Beads mitMikroperoxidase-11
- Seite 131 und 132: 118 4 Ergebnisse und DiskussionZur
- Seite 133 und 134: 120 4 Ergebnisse und Diskussiong HP
- Seite 135 und 136: 122 4 Ergebnisse und Diskussionaufw
- Seite 137 und 138: 124 4 Ergebnisse und Diskussionbeim
- Seite 139 und 140: 126 5 Zusammenfassung und Ausblick5
- Seite 141 und 142: 128 6 Anhang6 Anhang6.1 Öl-, Linol
- Seite 143 und 144: 130 6 AnhangLDLLOOHmMDAMP-11MSNMRNP
- Seite 145 und 146: 132 6 AnhangMeerrettichperoxidaseMe
- Seite 147 und 148: 134 6 Anhang6.5 NMR- und Massenspek
- Seite 149 und 150: 136 6 Anhang6.5.2 Hydroperoxide des
- Seite 151 und 152: 138 6 Anhang1 H-NMR-SpektrumMassens
- Seite 153 und 154: 140 6 AnhangMassenspektrum6.5.5 13S
- Seite 155 und 156: 142 6 Anhang6.5.6 13S-Hydroperoxyoc
- Seite 157 und 158: 144 6 Anhang1 H-NMR-Spektrum6.5.8 1
- Seite 159 und 160: 146 6 Anhang1 H-NMR-SpektrumMassens
- Seite 161 und 162: 148 6 AnhangMassenspektrum6.5.11 2-
- Seite 163 und 164: 150 6 Anhang6.5.12 2-[13S-Hydropero
- Seite 165 und 166: 152 6 Anhang6.6.3 NP-HPLC mit Nachs
- Seite 167 und 168: 154 6 Anhang6.6.6 RP-HPLC mit UV/VI
- Seite 169 und 170: 156 6 Anhang6.7 Lineare statistisch
- Seite 171 und 172: 158 6 Anhangf 2 Prüfgröße G[P;f
- Seite 173 und 174: 160 6 Anhang6.7.2 VersuchspläneDie
- Seite 175 und 176: 162 6 Anhang3. Optimierungsschrittl
- Seite 177 und 178: 6.7.3 Optimierungsergebnisse1. Opti
- Seite 179 und 180: 3. OptimierungsschrittEingangswerte
- Seite 181: 5. OptimierungsschrittEingangswerte
- Seite 185 und 186: 172 6 AnhangLagerungsdauerVolumen1-
- Seite 187 und 188: 174 6 AnhangUV (234 nm)FluoreszenzL
- Seite 189 und 190: 176 6 AnhangLagerungszeit a w -Wert
- Seite 191 und 192: 178 6 Anhang15161718192021222324252
- Seite 193 und 194: 180 6 Anhang43444546474849505152535
- Seite 195 und 196: 182 6 Anhang69707172737475767778798
- Seite 197 und 198: 184 6 Anhang94959697989910010110210
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6 Anhang 1696.8 Bestimmung der Trägerbelegung bei der Immobilisierung von Mikroperoxidasemittels der AtomabsorptionsspektrometrieZur Bestimmung der Trägerbelegung mittels der Atomabsorptionsspektrometrie und derStandardadditionsmethode wurde nach beendeter Immobilisierung jeweils eine bestimmteMenge des Reaktionslösung mit 0,05 % Salzsäure auf 25 ml aufgefüllt. 10 ml davon wurdendirekt zur Messung verwendet, weitere 10 ml wurden mit 50 bzw. 100 µl der Standardlösungaufgestockt. Die so vorbereiteten Lösungen wurden an einem Atomabsorptionsspektrometerauf den Eisengehalt hin untersucht (λ = 248,3 nm, Acetylen/Luft-Flamme; Perkin-ElmerIntensitron Multielementlampe Al/Ca/Cu/Fe/Mg/Si/Zn, Lampenstrom 30 mA).Die Berechnung der Konzentration erfolgte nach folgender Gleichung:cx=hxs⋅hx⋅ cs⋅V( Vx+ Vs) − hxVxsGleichung 21c xc sV xV sh xh xs= Konzentration der Probe= Konzentration des Standards= Volumen Probelösung= Volumen zugesetzter Standardlösung= Meßwert der Probe= Meßwert Probe + StandardAus der berechneten Eisenkonzentration der Lösung konnte mit Hilfe der Molmasse derMikroperoxidase (M = 1862 g/mol) und unter Berücksichtigung des Verdünnungsfaktors derEnzymgehalt im Reaktionsansatz nach der Immobilisierung berechnet werden. Bei bekannterMenge der zuvor eingesetzten Aminopropyl-CPG-Beads und der Mikroperoxidase konntedamit die Trägerbelegung in mg MP-11 / 100 mg Beads bestimmt werden. In nachstehenderTabelle sind die Meßergebnisse im einzelnen aufgeführt:
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