Dissertation Klaus Heitkamp 1999

116 4 Ergebnisse und Diskussion4.6.6.1 HPLC-Untersuchung mit enzymatischer Nachsäulenderivatisierung undFluoreszenzdetektionDer schematische Aufbau des verwendeten HPLC-Systems ist im Anhang in Kapitel 6.6.5dargestellt. Die Geräteparameter sind in nachstehender Tabelle aufgeführt:Trennsäule Merck RP-Select B; 5 µm; 125-4EnzymreaktorEluentReagenzDetektionswellenlänge UV/VIS-DetektorDetektionswellenlängenFluoreszenz-Detektor20-4, effektive Länge 17 mm gefüllt mit MP-11immobilisiert auf Aminopropyl-CPG-Beads(Beadsorte 50/63,2)Methanol/Wasser, 90/10 v/v; 0,5 ml/min4 mg 4-Hydroxyphenylessigsäure in 250 mlBoratpuffer 10 mmol/l; pH 10; 0,4 ml/min0-7,5 min: λ = 234 nm7,5-20 min: λ = 200 nmλ ex = 234 nm, λ em = 415 nmTabelle 34Geräteparameter zur HPLC-Bestimmung von Ölproben mit enzymatischerNachsäulenderivatisierungNeben der hohen Selektivität der enzymatischen Nachsäulenderivatisierung bot dieses Systemden weiteren Vorteil, daß parallel zur Messung der Hydroperoxide auch eine Bestimmung derzugehörigen Fettsäuren möglich war. Dazu wurde die Detektionswellenlänge des verwendetenUV/VIS-Detektors in den ersten 7,5 Minuten eines Laufes auf 234 nm eingestellt.Dadurch konnten die bei der Autoxidation und der anschließenden Umesterung des Ölsentstandenen Linolsäurehydroperoxide mit konjugiertem Doppelbindungssystem detektiertwerden. Nach 7,5 Minuten wurde die Detektionswellenlänge auf 200 nm umgestellt. Aufdiese Weise gelang es zusätzlich, auch die aus der Umesterung hervorgegangenen nichtoxidierten Fettsäuremethylester mit isolierter Doppelbindung zu detektieren.In Abbildung 57 sind zwei typische Chromatogramme einer umgeesterten Distelölprobe dargestellt.