DNA-Isolierung aus Bananen

Martin RaiberChemie Protokoll Nr.6DNA-Isolierung aus BananenMaterialien:2 Bechergläser 100 ml, Reagenzglas, Wasserbad, Mörser mit Pistill, Kaffeefilter,GabelChemikalien:5 ml Spülmittel, 2 g Citronensäure, 0,5g Kochsalz, 50 ml Wasser,Banane, Erlenmeyerkolben 100 ml, Feinwaschmittel, eiskaltes Ethanol98 % (Spiritus), Toluidinblau (w = 1 %)Durchführung:Wir mischten das Wasser, Spülmittel, Salz und die Citronensäure ineinem Erlenmeyerkolben anschließend zerdrückten wir in einemBecherglas eine drittel Banane mit der Gabel und gaben 30 ml derSpülmittel/Salz/Citronensäurelösung hinzu. Dann stellten wir dasBecherglas für 15 Minuten in ein 60°C warmes Wasserbad.Nach Abkühlen in kaltem Wasser (Eiswasser) zerrieben wir dieBananenstücke in einem Mörser mindestens 5 Minuten lang.Dann filtrierten wir die Suspension durch einen Kaffeefilter in ein Becherglas.Wir füllten ca. 3 cm des Filtrats in ein Reagenzglas ab und gaben einigeKörnchen Feinwaschmittel h i n z u .Wir mischten den Ansatz gut und überschichteten ihn ganzvorsichtig mit etwa der gleichen Menge eiskalten Alkohols. Dazuhielten wir das Reagenzglas schräg und ließen den Alkohol seitlichhineinfließen.Nach dem Isolieren der DNA färbten wir sie mit Toluidinblau an.Beobachtungen:Beim Auffließenlassen des eiskalten Alkohols entsteht eine schleimigeFlüssigkeit, die sich mit Toluidinblau anfärben lässt.Auswertung:Die entstehende schleimige, milchige Flüssigkeit ist die DNA der Banane.Das Spülmittel/Salz/Citronensäure-Gemisch dient dazu:1. Zu verhindern, dass Enzyme die Banane – und die DNA - zerstören( Citronensäure verhindert Braunfärbung ). Denaturierung dieserEnzyme durch pH-Änderung.2. Das Spülmittel zerstört die Zellmembrane der Zellen. Das Tensidgelangt durch die Zellwand zur Zellmembran, die aus einerLipiddoppelschicht besteht und zerstört sie, da das Tensid gleichaufgebaut ist. (polarer und unpolarer Rest)

Das Erwärmen beschleunigt den Prozess der Zerstörung der Membran unddenaturiert gleichzeitig eventuell vorhandene DNAasen – Enzyme, die dieDNA zersetzen würden.Zu lange Erwärmung würde die DNA schädigen, deshalb wird sieanschließend mit Eiswasser wieder abgekühlt.Das Zerreiben im Mörser zerstört die Zellwände mechanisch. Anschließendwerden durch das Filtrieren die Bestandteile der DNA und Proteine von denResten der Zellwände getrennt.Das dann hinzugegebene Feinwaschmittel enthält das Enzym Proteasewelches die noch vorhandenen Proteine in der Lösung abbaut.Nach Hinzugeben des eiskalten Alkohols fällt an der Grenzschicht DNA aus,weil diese sich nicht in Alkohol löst. Wasser und Alkohol verbinden sich,weswegen in dieser Mischung unlösbare DNA übrig bleibt. Diese entferntenwir mit der Hilfe eines Glasstabes. Die DNA kann nun mit Toluidinblaunachgewiesen werden kann.