PRAKTIKUM DER BIOCHEMIE

I - 8MeCuM – 1. Studienjahr/2. Halbjahr - SoSe 2004 – PRAKTIKUM DER BIOCHEMIE - Versuchsprotokolle2.2.11 Berechnen Sie mit Hilfe der Henderson-Hasselbalch’schen Gleichung die Hydrogencarbonat-Konzentrationenin Küvette 4 nach Begasen mit 5 Vol% CO 2 bzw. 10 Vol%CO 2 und daraus die Pufferkapazität des Phosphatpuffers in Küvette 4.5 Vol% CO 2 : [CO 2 ] = 1,5 mM; pH = 7,50;lg [HCO 3 - ]/1,5 = 7,50 – 6,35; [HCO 3 - ] = 21,2 mM10 Vol% CO 2 : [CO 2 ] = 3,0 mM; pH = 7,26;lg [HCO 3 - ]/3,0 = 7,26 – 6,35; [HCO 3 - ] = 24,4 mMPufferkapazität: ∆[Pufferbase]/ ∆pH = - (24,4 – 21,2)/(7,26 – 7,50) = 13,3 (mM/pH)Hinweis: Für jedes entstehende HCO 3 - wird eine Pufferbase HPO 4 2- des Phosphatpuffers"verbraucht" (siehe 2.2.10). Deshalb ist die Pufferkapazität des Phosphatpuffers∆ [HPO 4 2- ] / ∆pH = - ∆ [HCO 3 - ] / pH2.2.12 Für p-Nitrophenolat sollen die Extinktionskoeffizienten bei den Wellenlängen 490 nmund 405 nm berechnet werden. Dazu verwenden Sie den Mittelwert für die ∆E max -Werteaus der Tabelle 1 bzw. für die Küvetten 1 bis 3 aus der Tabelle 2 sowie die zugehörigenp-Nitrophenolat-Konzentrationen; Schichtdicke d = 1,00 cm.490 nm: Extinktionskoeffizient pNP - 490 nm:ε = ∆E max /cc = 0,02 x100/(100 + 2,1) = 0,01959∆E max = 0,457ε = 0,457/0,01959 = 23,3 M -1 cm -1405 nmε = (E max -E o )/ c⋅1 ;Berechnung der Konzentration c: 20 µl 2 mM p-NP-Lösung werden auf 1020 µlverdünnt; c = 2 ⋅ 20/1020 = 2/51 = 0,039 (mM)Beispiel: Mittelwerte Küv. 1-3: (0,709+0,717+0,733) = 0,720ε = 0,720/0,039 = 18,462 (mM -1 cm -1 ) → ε = 18462 (M -1 cm -1 )Sollwert: 18300Küvette 4 (Mittelwert): ε = 0,723/0,039 = 18,538 (mM -1 cm -1 ) → ε = 18538 (M -1 cm -1 )2.2.13 Welche Exktinktion ∆E max erwarten Sie (theoretisch) beim Titrationsversuch (Versuch1) im Extinktionsmaximum (405 nm)? Wäre diese Extinktion direkt messbar?c = 0,02 x100/(100 + 2,1) = 0,01959 (siehe 2.2.12)∆E max = ε · c = 18300 · 0,01959 = 358, 5Nein, niemals: Messbereich 0 - 3,000