Skript - Mikrobiologie und Weinforschung - Johannes Gutenberg ...

2. FÄRBUNGENMethylenblau-FärbungBakterien und Hefen lassen sich am einfachsten durch den basischenAnilinfarbstoff Methylenblau anfärben.Organismus:Bäckerhefe (Saccharomyces cerevisiae).Durchführung:1. Etwas Bäckerhefe mit einem Tropfen Wasser auf einem fettfreienObjektträger mit der Impföse verreiben.2. 1-2 Tropfen wässrige Methylenblaulösung auftropfen und mit derImpföse vermischen.3. Methylenblaulösung 2 min wirken lassen.4. Deckglas auflegen und mikroskopieren.Auswertung:Die lebenden Zellen sind nicht gefärbt, die Toten sind blau gefärbt.Reagenzien:Wässrige Methylenblaulösung:0,5 g Methylenblau in 100 ml Ringerlösung lösen.Ringerlösung: 225 mg NaCl, 10 mg KCl, 5 mg NaHCO 3 , 12 mg CaCl 2 in100 ml H 2 Ooder Methylenblaulösung nach Löffler (Fertigpräparat der Fa. Merck).30 ml gesättigte alkoholische Stammlösung von Methylenblau in 100 mlwässrige 0,01%ige KOH geben, zum Gebrauch 1:10 mit dest. Wasserverdünnen, ggf. filtrieren.KapseldarstellungDie Zellwände vieler Bakterien sind mit Kapseln umgeben. Kapseln sindSchleimhüllen, die kein Species-Merkmal und nicht lebensnotwendig sind,jedoch pathogene Keime gegen Phagocytose resistent machen. Bei vielenMikroorganismen kommt es zu einer ausgesprochenen Schleimabsonderung,wenn sie auf Saccharose kultiviert werden. Ein bekanntesBeispiel dafür ist Azotobacter chroococcum, der saccharosehaltigesMedium in kurzer Zeit in Gallerte umwandelt, die aus Dextran besteht. DieUmwandlung der Saccharose erfolgt durch extrazelluläres Enzym.Kapseln werden lichtmikroskopisch durch Negativfärbung nachgewiesen,durch Zusatz eines Farbstoffes (Tusche), der nicht in die Kapsel eindringt.8