Molekulare Allergiediagnostik bei Insektengift-Allergie - Phadia

Molekulare Allergiediagnostikbei Insektengift-AllergiePD Dr. med. J. Huss-MarpPhadia GmbH, Freiburg27. Juli 2011

Bildquelle: http://jem.rupress.org/content/205/12.cover-expansionCoverJournal of Experimental Medicine

Insektengift-Allergie• Häufigster Auslöser schwereranaphylaktischer Reaktionen beiErwachsenen• In Deutschland leiden ca. 3 % derBevölkerung an einer Anaphylaxieauf Hymenoptera-Gift• Sensibilisierungsrate 18 - 25 %

Gliederung1) Grundlagen der Molekularen Allergiediagnostik2) Darstellung der klinischen Relevanz an Fällen3) Umsetzung im klinischen Alltag4) Zusammenfassung

Diagnostischer Algorithmus Insektengift-AllergieSITTHERAPIEENTSCHEIDUNGKLINISCHE RELEVANZ?HauttestsPrickICsIgEi1, i3, CCDMUXF3TryptaseKÖRPERLICHE UNTERSUCHUNGANAMNESE

Sensibilisierung gegenBienen- und Wespengift inbis zu 40 % der FälleHemmer W. Kreuzreaktivität auf Bienen und Wespengift. Hautarzt 2008;59:194-199

Diagnostischer Algorithmus Insektengift-AllergieSITTHERAPIEENTSCHEIDUNGGgf. zelluläre KLINISCHE Tests (BAT) oder RELEVANZ? weiterführende TestsHauttestsPrickICsIgEi1, i3, CCDMUXF3TryptaseKÖRPERLICHE UNTERSUCHUNGANAMNESE

Weitere diagnostische VerfahrenSITTHERAPIEENTSCHEIDUNGIgE-Inhibition- Etabliertes Verfahren- Für SonderfälleMolekulareAllergiediagnostikWestern Blot- Semiquantitiativ- Geringe Standardisierung- Produkt derzeit nicht verfügbarDiagnostischer Stich- Ethisch nicht vertretbar- Logistische Probleme

Klinischer Nutzen Molekularer Allergiediagnostik• Identifiziert Allergene, nicht Allergenträger• Kreuzreaktivität vs. Spezies-spezifischerSensibilisierung• Hilft bei Auswahl der richtigen Therapie

Ein Allergenträger…

…enthält …von denen Tausende nur vonMolekülen…einige Allergene sind

Molekulare Allergiediagnostik= Diagnostik auf Ebene der Einzelallergene

Molekulare Grundlage einerDoppelsensibilisierung?3 Möglichkeiten

Quelle: Prof. Dr. Thilo Jakob,Forschergruppe Allergologie, Universitäts-Hautklinik Freiburg

BienengiftWespengiftQuelle: Prof. Dr. Thilo Jakob,Forschergruppe Allergologie, Universitäts-Hautklinik Freiburg

Insektengift-KomponentenBienengiftrApi m 1 – Phospholipase A2Spezifischer Marker für Bienengift-SensibilisierungWespengiftrVes v 1 – Phospholipase A1Spezifischer Marker für Wespengift-Sensibilisierung, v.a. Gemeine Wespen und HornissenZwischen Phospholipase A1 der Wespe und der Hornisse besteht eine Kreuzreaktivität.rVes v 5 – Antigen 5Spezifischer Marker für Wespengift-Sensibilisierung, v.a. Gemeine Wespen und HornissenZwischen Antigen 5 der Wespe, der Hornisse und der Feldwespe besteht eine Kreuzreaktivität.FeldwespengiftrPol d 5 – Antigen 5Spezifischer Marker für Wespengift-Sensibilisierung, v.a. FeldwespenZwischen Antigen 5 der Wespe, der Hornisse und der Feldwespe besteht eine Kreuzreaktivität.

ImmunoCAP ® InsektengifteGesamtextraktImmunoCAP ® InsektengifteAllergenkomponenten• i1Bienengift• rApi m 1Bienengift (i208)• i3• i77WespengiftFeldwespengift• rVes v 1• rVes v 5• rPol d 5Wespengift (i211)Wespengift (i209)Feldwespengift (i210)....

• 100 Patienten mit Anaphylaxie auf Bienengift bzw. Wespengift (im letztenJahr) und 30 gesunde Kontrollen• Untersuchung von sIgE gegenüber Bienengift, Wespengift, CCDs sowieApi m 1 und Ves v 5• sIgE gegen Api m1 in 97 % in Bienengiftallergikern• sIgE gegen Ves v 5 in 87 % in Wespengiftallergikern• sIgE gegen Api m 1 und Ves v 5 (n=17) echte DoppelsensibilisierungMüller UR, et al. Allergy 2009;64:543-48

Müller UR, et al. Allergy 2009;64:543-48

• 123 Patienten mit anaphylaktischer Insektengiftreaktion(Stichereignis lag bis zu 10 Jahre zurück)• Untersuchung von sIgE gegenüber Bienengift,Wespengift, CCDs sowie Api m 1 und Ves v 5(ImmunoCAP i208, i209)Hofmann, SC et al. J Allergy Clin Immunol 2011;127:265-7

Herkömmliche extraktbasierte Diagnostik123 Patienten mit anaphylaktischer Insektengiftreaktion und positivem Prick-Test(34 Bienenstich-, 59 Wespenstichreaktionen, 30 nicht identifiziertes Insekt)WV (i3)singlepositiveBV (i1)singlepositiveBienengiftextrakt: i1 (BV)Wespengiftextrakt: i3 (WV)n=32n=18n=9BV + WVdoublenegativen=64BV + WVdoublepositiveIn 52 % der Fälle Unklarheit:Echte DoppelsensibilisierungoderKreuzreaktion?Hofmann, SC et al. J Allergy Clin Immunol 2011;127:265-7Quelle: Prof. Dr. Thilo Jakob,Forschergruppe Allergologie, Universitäts-Hautklinik Freiburg

Mehrwert durch Molekulare AllergiediagnostikHerkömmlicheDiagnostikMolekulare AllergiediagnostikApi m 1 (i208) Ves v 5 (i209)19 %39 %Api m 1 positiveVes v 5 positive58 %mono-sensitizedn=9BV + WVdoublenegativen=64n=64BV + WVdoublepositive36 %Api m 1 + Ves v 5double positiveDouble negativesIgE gegenüber Api m 1 and Ves v 5 erlaubt die Diskriminierungzwischen echter Doppelsensibilisierung und KreuzreaktivitätSens.: 79 % Api m 1, 90 % Ves v 5; Spez.: 100 % Api m1, 93 % Ves v 56 %Hofmann, SC et al. J Allergy Clin Immunol 2011;127:265-7Quelle: Prof. Dr. Thilo Jakob,Forschergruppe Allergologie, Universitäts-Hautklinik Freiburg36 % trulydouble-sensitized

Mehrwert durch Molekulare AllergiediagnostikHerkömmlicheDiagnostikMolekulare AllergiediagnostikApi m 1 (i298) Ves v 5 (i209)56%40%Ves v 5 positiven=9BV + WVdoublenegative36%44%Api m 1 + Ves v 5double negative8 patients WV anaphylaxis1 patient BV anaphylaxissIgE gegenüber Ves v 5 erlaubt die Detektion niedriger Spiegel von IgE gegenSpezies-spezifisches Allergen, d.h. führt zu einer besseren Diskriminierungrichtig und falsch doppelnegativer PatientenHofmann, SC et al. J Allergy Clin Immunol 2011;127:265-7Quelle: Prof. Dr. Thilo Jakob,Forschergruppe Allergologie, Universitäts-Hautklinik Freiburg

Api m1Korrelation zwischen herkömmlicherund Molekularer AllergiediagnostikVes v5100BV / Api m1100VV vs Ves v51010110.10.10.010.1 1 10 100BVp < 0,0001r = 0,820.010.01 0.1 1 10 100VVp < 0,0001r = 0,69Quelle: Prof. Dr. Thilo Jakob,Forschergruppe Allergologie, Universitäts-Hautklinik Freiburg

• Testresultate abhängig von Kollektiv, Region etc.(Einschlusskriterien bei Patientenauswahl!)• Api m 1 und Ves v 5 nicht immer ausreichend umBienen- & Wespengift-Allergiker zu unterscheiden• Testung einer Kombination von Allergenkomponentenempfohlen um diagnostische Lücke zu verkleinernSturm GJ et al. J Allergy Clin Immunol 2011Hofmann, SC et al. J Allergy Clin Immunol 2011Korosec P et al. J Allergy Clin Immunol 2011

Quelle: Prof. Dr. Jakob, Forschergruppe Allergologie, Universitäts-Hautklinik FreiburgHofmann, SC et al. J Allergy Clin Immunol 2011Kombination von Allergenkomponenten steigert Sensitivität!

2011: 100 Jahre spezifische ImmuntherapieJohn FreemanLeonard NoonIm Jahre 1911 Publikation der ersten Arbeit zur spezifischen Immuntherapie (SIT)

Empfohlene ImmunoCAP-Diagnostikvor SIT bei Hymenopterengiftallergie-+i1 Bienengifti3 WespengiftTryptase+-++i1 & i3 positiv-+i208 rApi m 1 (Biene) +i211 rVes v 1; i209 rVes v 5 (Wespe)o214 CCD MUXF3-++i208, i209,i211 positivDoppelsensibilisierung auf Biene- u.WespengiftWespengiftsensibilisierungBienengiftsensibilisierungIndikationsstellung zur SIT in Zusammenschau mit Anamnese, Hauttests, Tryptasekonzentration und ggf. weiteren Befunden

Fall 1

Fallbeispiel – Julia, 45 Jahre altVorgeschichte• Stich durch ein unbekanntes Insekt in den Mittelfinger derrechten Hand• Nach mehreren Minuten– Auftreten von generalisiertem Juckreiz– fleckige Rötungen am Stamm– Atemnot und Engegefühl im Hals• Besserung der Symptomatik nach notärztlicher Behandlungmit systemischen Glukokortikosteroiden und Antihistaminika

Konventionelle DiagnostikPrick-Testergebnisse• Bienengift (100 μg/ml) ++• Wespengift (300 μg/ml) ++ImmunoCAP ® Testergebnisse• Bienengift i1 5,9 kU A /l• Wespengift i3 1,3 kU A /l• ImmunoCAP ® Gesamt-IgE 16,7 kU A /l• ImmunoCAP ® Tryptase5,4 μg/l

Erweiterte Diagnostik mit ImmunoCAP ® AllergenkomponentenDie Testergebnisse mit ImmunoCAP ® Allergenkomponenten:Bienengift rApi m 1 4,7 kU A /lWespengift rVes v 1

BefundinterpretationDer Komponententest auf molekularer Basis mit den CCD-freienrekombinanten Allergenen (rApi m 1 sowie rVes v 1, rVes v 5, rPol d 5) zeigt:• Starke Sensibilisierung gegen das Hauptallergen des Bienengifts rApi m 1• Keine Sensibilisierung gegen die Hauptallergene des Wespengifts• Spezifisches IgE gegen die kreuzreaktiven Kohlenhydrat-Determinanten(CCD MUXF3) erklärt den positiven Test auf Wespengift (i3 and i77).DiagnoseDie spezifische Sensibilisierung gegen Bienengift bestätigt den Verdacht aufBienengift-Allergie.BehandlungAufgrund dieser Befunde wird eine SIT nur mit Bienengift durchgeführt.

Fall 2

Fallbeispiel – Thomas, 68 Jahre altVorgeschichte• Stich durch nicht identifiziertes Insekt in die rechte Schulter• Nach ca. 30 Minuten Auftreten von:– allgemeinem Hitzegefühl– Juckreiz– generalisiertem Exanthem– Gesichtsschwellung– Schwindel• Besserung der Symptomatik nach einer Behandlung durch denHausarzt mit intravenösen Glukokortikosteroiden und oralemAntihistaminikum.

Konventionelle DiagnostikPrick-Testergebnisse• Bienengift (100 μg/ml) +• Wespengift (100 μg/ml) +ImmunoCAP ® TestergebnisseBienengift i1 3,5 kU A /lWespengift i3 4,0 kU A /lImmunoCAP ® Gesamt-IgE 460 kU A /lImmunoCAP ® Tryptase 1,1 μg/l

Erweiterte Diagnostik mit ImmunoCAP ® AllergenkomponentenDie Testergebnisse mit ImmunoCAP ® AllergenkomponentenBienengift rApi m 1 3,9 kU A /lWespengift rVes v 1 1,1 kU A /lrVes v 5 3,7 kU A /lCCD MUXF3

BefundinterpretationDie Molekulare Allergiediagnostik zeigt:• eine echte Doppelsensibilisierung gegen beide spezifischenHauptallergene der Wespe rVes v 1 und rVes v 5.• eine Sensibilisierung gegen das spezifische Hauptallergen derBiene rApi m 1.Die positive Antwort auf beide extrakt-basierten Tests (i1, i3) ist somitnicht allein auf CCD-Kreuzreaktivität zurückzuführen.DiagnoseDie Doppelsensibilisierung gegen Bienen- und Wespengift bestätigtden Verdacht auf eine Bienen- und Wespengift-Allergie.BehandlungEs wird eine SIT mit Bienen- und Wespengift durchgeführt.

Welche Vorteile bieten IhnenImmunoCAP ® Allergenkomponenten?• Klären Sie ab, ob doppelt positive Testergebnisse auf eineechte Doppelsensibilisierung oder eine Kreuzreaktionzurückgehen• Bestimmen Sie die geeignete SIT.• Verbessern Sie Ihr Patientenmanagement.

Zusammenfassung• Herkömmliche Diagnostik lässt Lücke bei Insektengiftallergie• IgE-Inhibitionstests sind etabliertes, jedoch aufwändiges Verfahrenfür unklare Fälle• Molekulare Allergiediagnostik kann dazwischen liegende Lückeschließen• Zusätzlich zu rApi m 1, rVes v 1 und rVes v 5 sind weitereEinzelallergene in Vorbereitung

Unsere aktuellen Webinar-TermineMolekulare Allergiediagnostik bei Soja-AllergieMittwoch, 17. August 2011, 16:00 – 16:45 UhrMolekulare Allergiediagnostik bei Insektengift-AllergieMittwoch, 7. September 2011, 16:00 – 16:45 UhrImmunoCAP ISAC ®Donnerstag, 22. September 2011, 16:00 – 16:45 UhrGrundlagen der Molekularen AllergiediagnostikDienstag, 27. September 2011, 20:00 – 20:45 UhrWir freuen uns auf Ihre Teilnahme!

Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!Immuno Solid-phase Allergen ChipArial Narrow 18 BoldArial Narrow 18 Arial Narrow 18Arial Narrow 18 BoldArial Narrow 18 Arial Narrow 18Arial Narrow 18 BoldArial Narrow 18 Arial Narrow 18www.phadiawebinar.dede-info.webinar@phadia.com