ChromoCult® Coliformen Agar ES - mibius

ChromoCult ®Coliformen Agar ESZum Nachweis von Coliformenin Abwasser und Frischprodukten.

ChromoCult ®Coliformen Agar ESArt. Nr. 1.00850.0500 (500 g)Selektivagar zum gleichzeitigen Nachweis und zur Keimzahlbestimmungvon Gesamtcoliformen und E.coli in Frischprodukten sowie in Abwasser.AOAC Approval in VorbereitungWirkungsweiseDie Kombination geeigneter Peptone und die Pufferungdurch MOPS gewährleisten ein schnelles Anwachsen vonColiformen und eine optimale Umsetzung der chromogenenSubstrate. Der Gehalt an Gallesalzen und Propionathemmt weitgehend das Wachstum Gram-positiver undGram-negativer Begleitkeime.Der simultane Nachweis von Gesamtcoliformen und E.coliwird durch die Kombination von zwei chromogenenSubstraten ermöglicht. Das Substrat Salmon-ß-D-GALwird durch die für Coliforme charakteristische ß-D-Galactosidasegespalten und bewirkt eine rosa-rote Färbung derColiformen-Kolonien. Der Nachweis der für E.coli charakteristischenß-D-Glucuronidase erfolgt über das SubstratX-ß-D-Glucuronid, das eine Blaufärbung der positivenKolonien bewirkt.Da die E.coli Kolonien sowohl Salmon-ß-D-GAL alsauch X-ß-D-Glucuronid spalten, färben sie sich dunkelblauviolettund sind somit leicht von den übrigen Coliformenzu differenzieren, die rosa-rot erscheinen.Typische Zusammensetzung (g/Liter)Peptone 5,0; Kaliumchlorid 7,5; MOPS 10,0; Gallesalze 1,15;Propionat 0,5; Agar-Agar 10,0;6-Chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranosid 0,15;Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranosid 0,1;5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-glucuronsäure 0,1.Zubereitung34,5 g in 1000 ml demin. Wasser im siedenden Wasserbadoder im strömenden Dampf unter regelmäßigem Umschwenkensolange kochen, bis der Nährboden vollständig gelöst ist(ca. 45 Minuten).Nicht autoklavieren, nicht überhitzen!Der Nährboden wird im Wasserbad auf 45 -50°C abgekühlt(nicht länger als 2 Stunden, da es sonst zu Ausfällungenkommen kann) und in sterile Petrischalen gegossen.pH: 7.0 ± 0.2 bei 25°C.Die Nährbodenplatten sind klar und farblos. Das fertigzubereitete Nährmedium ist 2 Wochen bei einer Lagerungstemperaturvon +4°C ± 2°C stabil.ProbenvorbereitungUm eine Beeinträchtigung der Färbung der Coliformen/E.coli durch Probeneinfluss (z.B. niedriger pH-Wert) zuverhindern, ist eine Verdünnung der Probe mit einer gepuffertenLösung, z.B. Peptonwasser (gepuffert) oderNatriumchlorid-Pepton-Bouillon (gepuffert) im Verhältnis1 : 10 zu empfehlen.AnwendungDer Nährboden wird im Einmischverfahren, Oberflächenausstrichoder mittels Membranfiltertechnik beimpft.Das Filtermaterial beeinflusst sowohl das Wachstum alsauch die Farbgebung der Kolonien. Als Referenzfilter dientder Cellulose-Mischester-Filter GN-6 der Fa. Pall.(OSSMER, 1999).Bebrütung: 24 Stunden bei 35–37°C.AuswertungE.coli: Dunkelblau-violette Kolonien (Salmon-ß-D-GALund X-ß-D-Glucuronid Reaktion). Einige E.coli Stämme(3-4%) sind ß-Glucuronidase-negativ und wachsen als rosaroteKolonien z.B. E.coli O157 Stämme.Gesamtcoliforme: Rosa-rote Kolonien (Salmon-ß-D-GALReaktion) und dunkelblau-violette Kolonien (E.coli).Begleitkeime: Farblose oder türkis gefärbte Kolonien.

Farbe macht den Unterschied.QualitätskontrolleLiteraturTeststämme Inokulum Wachstum Koloniefarbe(KBE/Platte)Escherichia coli 30 – 300 + dunkelblau/violettATCC 11775Citrobacter freundii 30 – 300 + rosa-rotATCC 8090Enterobacter cloacae 30 – 300 + rosa-rotATCC 13047Salmonella typhimurium 30 – 300 + farblosATCC 14028Aeromonas hydrophila 1000 – 2000 -ATCC 7966Serratia liquefaciens 1000 – 2000 -ATCC 27592Staphylococcus aureus 1000 – 2000 -ATCC 25923Lactococcus lactis 1000 – 2000 -ATCC 19435FRAMPTON, E.W.; RESTAINO, L. and BLASZKO, L.:Evaluation of the ß-glucuronidase substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-glucuronide (X-GLUC) in a 24 hour direct platingmethod for Escherichia coli.• J.Food Protection 51:402–404 (1988)OSSMER, R.; SCHMIDT, W.; MENDE, U.:ChromoCult® Coliform Agar-Influence of Membrane Filter Qualityon Performance. Poster Präsentation Congresso de la Sociedad.• Espanola de Microbiologie, Granada, Spain (1999)KILIAN, M. and BÜLOW, P.:Rapid diagnosis of Enterobacteriaceae. I. Detectionof bacterial glycosidases.• Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sect. B 84: 245–251 (1976)LE MINOR, L. and BEN HAMIDA, F:Advantages de la recherche de la ß-galactosidase sur celle dela fermentation du lactose en milieu complexe dans le diagnosticbactériologique, en particulier des Enterobacteriaceae.• Ann. Inst. Pasteur (Paris) 102: 267–277 (1962)E.coliMANAFI, M. and KNEIFEL, W. A:Combined chromogenic-fluorogenic medium for the simultaneousdetection of total coliforms and E.coli in water.• Zentralbl. Hyg. 189: 225–234 (1989)Zusätze und HilfsmittelCitrobacterArt. Nr. Bezeichnung Packung1.10582.0500 Natriumchlorid-Pepton- 500 gBouillon (gepuffert)1.07228.0500 Pepton-Wasser (gepuffert) 500 g

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