Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

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4 Analytik 70 Abb. 4.16 MALDI-TOF-Massenspektren. A) erhalten nach Abspaltung der in 5 Runden PED erzeugten Peptidleiter von 77. B) erhalten nach Abspaltung der in 5 Runden PED erzeugten Peptidleiter von 83. C) Matrix-Referenz-Spektrum.
5 Anwendung der Methode 5 Anwendung der Methode Mit der im vorhergehenden Kapitel beschriebenen Erweiterung des partiellen Edman- Abbaus auf Cyclopeptide steht jetzt eine Methode zur Verfügung, welche eine direkte Sequenzierung von festphasengebundenen Cyclopeptiden ermöglicht. Nach der Entwicklung soll nun ihr Nutzen anhand einer konkreten Anwendung gezeigt werden. 5.1 Streptavidin: Ein biologisches Modelltarget Bei der Suche nach einem geeigneten biologischen Modelltarget fiel die Wahl auf Streptavidin. Streptavidin ist ein 53 kDa großes Protein, das aus dem Bakterium Streptomyces avidinii isoliert werden kann. Es handelt sich um ein homotetrameres Protein, da es aus vier identischen Untereinheiten besteht. Jede dieser Untereinheiten kann mit sehr hoher Affinität (Ka ~ 10 14 –10 15 M -1 ) ein Biotin-Molekül binden. Die Streptavidin-Biotin-Bindung ist eine der stärksten bekannten nicht- kovalenten Bindungen in biologischen Systemen. Im Gegensatz zu Avidin, das ebenfalls Biotin binden kann, hat Streptavidin wegen seiner geringen Gesamtladung einen isoelektrischen Punkt im neutralen Bereich. Zudem weist Streptavidin keinerlei Glycosylierungen auf. Somit sind unspezifische Bindungen in Streptavidin-Systemen seltener als bei der Verwendung von Avidin. Aufgrund dieser Tatsachen (hohe Bindungsaffinität und wenige unspezifische Bindungen) findet Streptavidin häufig Einsatz in verschiedenen Methoden der Biochemie, [109, 110] Immunologie [111] und Molekularbiologie. Streptavidin bindet aber nicht nur selektiv an Biotin, sondern erkennt auch selektiv Peptidsequenzen mit HPQ-Motiv. [112] Schon in der ersten Anwendung der Split-Mix- Bibliothek wurde von Lam et al. Streptavidin als biologisches Target ausgewählt, [113] und ist bis heute ein sehr beliebtes Anwendungsmodell. Die HPQ-Peptid/ Streptavidin-Erkennung bildet auch die Grundlage für die heute häufig in der Biochemie angewandte Strep-tag-Affinitätschromatographie. [114, 115] Bei der Expression wird dem gewünschten Protein hierzu eine zehn Aminosäuren lange Peptidsequenz angehängt (Strep tag I = Protein-AWRHPQFGG-OH; Strep tag II = 71
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Neue Methoden zur Sequenzierung fes
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meinem Großvater Albert Anton Höf
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Vorwort Natürlich gibt es ein Lebe
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Abkürzungen DMF N,N’-Dimethylfor
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Abkürzungen TG Tenta Gel Thi Thien
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8 Experimenteller Teil 8.6 SPR-Expe
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9 Literaturverzeichnis 9 Literaturv
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9 Literaturverzeichnis [64] P. D. W
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9 Literaturverzeichnis [133] T. Woh
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10 Anhang 10.1 HPLC-offline-MS-Char
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10.1.3 Peptid 71 (enzymatische Ring
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10.1.5 SPR Peptide 92-97 H-Lys-His-
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H-Lys-Gln-Pro-His-His-Gly-Glu-βAla
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H-Lys-His-Pro-Gln-His-Gly-Glu-βAla
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10.2 Massenspektren der fluoreszenz
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10.3 MALDI-TOF-Massenspektren nach
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Intens. 800 600 400 200 Intens. 200
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Peptid 10 tR = 9,7 min Peptid 10 tR
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Peptid 10 tR = 9,7 min Peptid 10 tR
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10.6 SPR-Experimente Steady state a
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