Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Erfolgreiche ePaper selbst erstellen
Machen Sie aus Ihren PDF Publikationen ein blätterbares Flipbook mit unserer einzigartigen Google optimierten e-Paper Software.
4.2.3.3 Anwendung des Konzepts auf einzelne Kugeln<br />
4 Analytik<br />
Wie in Abschnitt 4.2.3.1 beschrieben, konnte gezeigt werden, dass sich das Konzept<br />
des partiellen Edman-Abbaus erfolgreich auf unser System übertragen lässt. Die<br />
Sequenzierung des Modellpeptids gelang und die dabei beobachtete Nebenreaktion<br />
konnte aufgeklärt werden. Bisher wurde jedoch stets eine größere Menge an<br />
Harzkugeln zur Sequenzierung herangezogen. Nun sollte überprüft werden, ob auch<br />
einzelne Harzkugeln für eine Sequenzbestimmung ausreichen. Der partielle Edman-<br />
Abbau erfolgte wie bereits oben beschrieben. Vor der bromcyanvermittelten<br />
Abspaltung der Peptidleiter von der festen Phase wurden die Harzkugeln unter einer<br />
Stereolupe separiert und einzeln in Eppendorfcaps platziert. Für die Abspaltung<br />
wurde eine unmittelbar zuvor hergestellte Bromcyanlösung in die Caps pipettiert. Die<br />
Kugeln liess man darin über Nacht quellen. Die jetzt in der Lösung vorhandene<br />
Peptidleiter wurde anschließend vom Lösungsmittel befreit. Der Rückstand wurde in<br />
MALDI-Lösungsmittel aufgenommen, auf das Target geladen und MALDI-TOF-<br />
Massenspektren gemessen. Zusätzlich zu den Proben wurde immer ein Spot auf<br />
dem Target als Referenz mit MALDI-Solvent/Matrix (α-Cyano-4-Hydroxyzimtsäure,<br />
CHCA) bestückt. Im ersten Versuch wurden für Matrix-Referenz und Probe<br />
(abgespaltene Peptidleiter) analoge Spektren erhalten.<br />
Abb. 4.15 Mechanismus der Reduktion von Sulfoxid mit NH4I in TFA unter Zusatz von<br />
Dimethylsulfid in Peptiden. [103]<br />
67