Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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3 Sollbruchstellen<br />
Die Synthese des linearen Vorläuferpeptids 27 erfolgte unter Standard-Fmoc-SPPS<br />
am Peptidsynthesizer. Der Syntheseverlauf wurde mittels Leitfähigkeitsmessung der<br />
Fmoc-Abspaltlösung verfolgt. Nach Entschützung des N-Terminus und der<br />
Carboxylgruppe der Glutaminsäureseitenkette erfolgte zwischen diesen die<br />
Cyclisierung unter Verwendung von PyBOP. Die Reaktionsbedingungen können der<br />
Abb. 3.14 entnommen werden. Zur Untersuchung der Sollbruchstelle wurde das<br />
harzgebundene Cyclopeptid 31 anschließend über Nacht mit Bromcyan in wässrig<br />
saurer Lösung behandelt. Alle Schritte wurden mittels RP-HPLC und nachfolgender<br />
Massenspektrometrie analysiert (Abb. 3.15). In den Chromatogrammen der Peptide<br />
28, 30 und 32 wurden je zwei Hauptpeaks beobachtet. Die massenspektrometrische<br />
offline-Charakterisierung ergab, dass es sich bei den Peaks mit niedrigerer<br />
Retentionszeit (17,921 min, 13,395 min und 13,710 min) jeweils um das<br />
entsprechende Peptid handelte, bei dem Methionin oxidiert vorliegt. Aus den<br />
Chromatogrammen in Abb. 3.15 wird ebenfalls ersichtlich, dass das cyclische Peptid<br />
32 durch Behandlung mit BrCN zum linearen Peptid 33 umgewandelt werden kann.<br />
Methionin ist somit als Sollbruchstelle in cyclischen Peptiden durchaus geeignet.<br />
Die daran anschließenden massenspektrometrischen Sequenzierungsexperimente<br />
sind in Abschnitt 4.1.2 ausführlich beschrieben. Wie dort ausführlich erläutert stellte<br />
sich die rein massenspektometrische Sequenzierung als ungeeignet heraus, somit<br />
erübrigte sich die Anwendung einer simultanen Ringöffnung und Harzspaltung.<br />
Der partielle Edman-Abbau (PED) zeigte sich dagegen als geeigneter zur<br />
Sequenzierung (eine ausführliche Beschreibung hierzu befindet sich in Kapitel 4).<br />
Dies stellt jedoch besondere Anforderungen an den Linker. Ein simultanes<br />
Peptidringöffnen und Abspalten des Peptides vom Harz ist bei dieser Methode nicht<br />
mehr möglich. Alle Schritte müssen festphasengebunden vonstatten gehen und erst<br />
unmittelbar vor der Analytik darf das Peptid vom Harz gespalten werden.<br />
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