Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.3.10.3 Synthese des fluoreszenzmarkierten Peptids SRBS-Y230
Wie in AAV 2 beschrieben wurde das Wang-Harz mit Fmoc-Asp(O t Bu)-OH beladen
(Beladungsdichte 0,7 mmol/g). Anschließend erfolgte nach AAV 7 die Elongation der
ersten neun Aminosäuren am Synthesizer unter Verwendung des 20µM spezial.kem
chemistry files. Im ersten Modul wurde das Harz gewaschen (Modulfolge: eGD). Die
Modulfolge der darauffolgenden Zyklen lautete BbDAFiiiCid (Single Couple,
Cap./5eq.). Mit einem abschließenden final wash (Modulfolge: Dc) wurde die
vorläufige automatisierte SPPS beendet. Folgende Aminosäurebausteine wurden
verwendet: Fmoc-Glu(O t Bu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Lys(Boc)-OH und Fmoc-Tyr( t Bu).
Zur Überprüfung der Synthese wurden Testabspaltungen durchgeführt. Hierzu
wurden kleine Mengen des Peptids entnommen und nach AAV 19 vorgegangen.
Fmoc-Ile-Tyr-Glu-Glu-Leu-Leu-Lys-His-Asp-OH (119→)
MALDI-TOF-MS: (roh)
[M+H] + gemessen Intensität Beschreibung [M+H] + berechnet
1381,5 m/z 100% Fmoc-Ile…-OH 1381,6674 m/z (C68H93N12O19 + )
1088,3 m/z 13% Ac-Tyr...-OH 1088,5259 m/z (C49H74N11O17 + )
925,2 m/z 21% Ac-Glu 2 …-OH 925,4625 m/z (C40H65N10O15 + )
796,2 m/z 9% Ac-Glu 1 ..-OH 796,4199 m/z (C35H58N9O12 + )
Der automatisierten SPPS folgte eine manuelle Abspaltung der N-terminalen Fmoc-
Schutzgruppe nach AAV 10. Daraufhin wurde Fmoc-Ala-Ser(Ψ MeMe Pro)-OH (5 eq.)
unter Aktivierung mit 5 eq. PyBOP, 5 eq. HOBt und 10 eq. DIPEA angeknüpft. Es
wurde wie in AAV 3 beschrieben vorgegangen.
Die weitere Verlängerung der Peptidkette erfolgte wiederum am Peptidsynthesizer.
Hierzu wurde wie bereits zu Beginn der Synthese beschrieben vorgegangen.
Folgende Aminosäurebausteine kamen zum Einsatz: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-
OH, Fmoc-Pro-OH und Fmoc-Thr( t Bu)-OH.
Zur Überprüfung der Synthese wurden Testabspaltungen durchgeführt. Hierzu
wurden kleine Mengen des Peptids entnommen und nach AAV 19 vorgegangen.
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