Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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8 Experimenteller Teil<br />
8.3.9 Synthese der Peptide (92-97) zur Bestimmung der KD-Werte<br />
Die Festphasensynthese der Peptide erfolgte an RinkAmid-Research-Harz (R-RAM-<br />
TG, Rapp Polymer) am Peptidsynthesizer nach AAV 7. UV FastMoc0.10,S200.kem<br />
wurde als chemistry file ausgewählt. Für den ersten Zyklus wurde die Modulfolge<br />
ecDBgADEFd (Zyklus1: Amid) verwendet. Zyklus zwei bis elf verlief mit der<br />
Modulfolge BbADEFfhd (SingCoup,CondCap.) und als abschließender Zyklus folgten<br />
die Module ecD (Complete wash). Folgende Aminosäurebausteine wurden<br />
verwendet: Fmoc-βAla-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH,<br />
Fmoc-Glu(OAll)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH und Fmoc-Lys(Alloc)-OH bzw.<br />
Boc-Lys(Alloc)-OH.<br />
Die Abspaltung der Alloc- und Allyl-Schutzgruppe erfolgte nach AAV 11 Variante B.<br />
Nach ausführlichem Waschen des Harzes, einer Testabspaltung und MALDI-TOF-<br />
MS Analyse wurde das Harz in zwei gleich große Aliquote aufgeteilt. Eine Hälfte<br />
wurde als lineares Peptid direkt nach AAV 19 vom Harz gespalten.<br />
Die zweite Hälfte wurde wie AAV 8 beschrieben cyclisiert, und anschließend nach<br />
AAV 19 vom Harz gespalten.<br />
Hitsequenz: 93/92<br />
H-Lys-His-Pro-Gln-His-Gly-Glu-βAla-Pro-Pro-Arg-NH2 (93)<br />
Roh MALDI-TOF-MS: 1252,1 m/z<br />
Präparative RP-HPLC (Eurosphere Säule): (11-15% B° in 20 min, 9,8 ml/min) tR = 7,0 min<br />
Ausbeute nach HPLC: 17% (10,7 mg)<br />
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (8-30% B° in 45 min, 0,9 ml/min) tR = 12,4 min<br />
ESI-QTOF: 1252,6653 m/z (±0,4 ppm)<br />
Berechnet: C54H86N21O14 + (1252,6658 m/z)<br />
H-cyclo[Lys-His-Pro-Gln-His-Gly-Glu]-βAla-Pro-Pro-Arg-NH2 (92)<br />
Roh MALDI-TOF-MS: 1234,3 m/z<br />
Präparative RP-HPLC (Eurosphere Säule): (12-18,5% B° in 20 min, 9,8 ml/min) tR = 6,6 min<br />
Ausbeute nach HPLC: 22% (13,5 mg)<br />
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (8-30% B° in 45 min, 0,9 ml/min) tR = 13,1 min<br />
ESI-QTOF: 1234,6576 m/z (±1,9 ppm)<br />
Berechnet: C54H84N21O13 + (1234,6552 m/z)<br />
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