Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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8 Experimenteller Teil<br />
8.3.8 Synthese des Peptids 71 zur Untersuchung einer<br />
enzymatischen Ringöffnung<br />
Wie in AAV 1 beschrieben, wurde TentaGel mit Fmoc-Met-OH beladen<br />
(Beladungsdichte: 0,12 mmol/g). Anschließend erfolgte nach AAV 7 die Synthese<br />
des linearen Vorläuferpeptids unter Verwendung des 20µM 3ml.kem chemistry files.<br />
Im ersten Zyklus wurde das Harz gewaschen (Modulfolge: eGD). Die Modulfolge der<br />
darauffolgenden Zyklen lautete BbDAFiiihd (Single Couple, Cond Cap./5eq.). Mit<br />
einem abschließenden final DCM wash (Modul: c) wurde die automatisierte SPPS<br />
beendet. Folgende Aminosäurebausteine wurden verwendet: Fmoc-βAla-OH,<br />
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu-OAll, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH,<br />
Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ser( t Bu)-OH und Fmoc-Tyr( t Bu)-OH. Nach der<br />
automatisierten SPPS erfolgte die Abspaltung der Fmoc-Schutzgruppe (AAV 10), die<br />
Abspaltung der Allyl-Schutzgruppe (AAV 11a) und schließlich die Cyclisierung mit<br />
PyBOP nach AAV 8.<br />
Zur Analytik wurden kleine Mengen des Peptids entnommen und mit BrCN nach AAV<br />
14 gespalten.<br />
Fmoc-Lys-Ala-Tyr-Phe-Ser-Ala-Gly-Glu(βAla-Pro-Pro-βAla-Hsl)-OAll (67→68)<br />
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (10-100% B° in 20 min, 1ml/min) tR = 15,47 min<br />
MALDI-MS: 1554,3 m/z [M+H] +<br />
Berechnet: C78H101N14O20 + (1553,7311 m/z)<br />
H-Lys-Ala-Tyr-Phe-Ser-Ala-Gly-Glu(βAla-Pro-Pro-βAla-Hsl)-OH (69→70)<br />
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (10-100% B° in 20 min, 1 ml/min) tR = 10,6 min<br />
MALDI-MS: 1291,7 m/z [M+H] +<br />
Berechnet: C60H87N14O18 + (1291,6317 m/z)<br />
cyclo-[Lys-Ala-Tyr-Phe-Ser-Ala-Gly-Glu(βAla-Pro-Pro-βAla-Hsl)] (71→72)<br />
Analytische RP-HPLC (Eurosphere Säule): (10-100% B° in 20 min, 1 ml/min) tR = 12,1 min<br />
MALDI-MS: 1274,5 m/z [M+H] +<br />
Berechnet: C60H85N14O17 + (1273,6212 m/z)<br />
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