Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

8 Experimenteller Teil
8.3.5 Synthese des festphasengebundenen Peptids 63 zur
Untersuchung der Trp-Xaa Sollbruchstelle
Standard aminofunktionalisiertes TentaGel wurde nach AAV 1 mit Fmoc-Met-OH
beladen. Es ergab sich eine Beladungsdichte von 0,13 mmol/g. Die Festphasen-
synthese des linearen Peptids 23 erfolgte am Peptidsynthesizer nach AAV 7. 20µM
spezial.kem wurde als chemistry file ausgewählt. Für den ersten Zyklus wurde die
Modulfolge eDG (Initial Wash) verwendet. Zyklus zwei bis zwölf verlief mit der
Modulfolge BbDAFiiihd (Single Couple, Cond Cap/5eq.) und als abschließender
Zyklus folgten die Module Dc (Final Wash). Folgende Aminosäurebausteine wurden
verwendet: Fmoc-βAla-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH,
Fmoc-Glu-OAll, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Phe(4Br)-OH, Fmoc-Pro-OH und Fmoc-
Trp(Boc)-OH. Nach der automatisierten SPPS erfolgte die Abspaltung der Fmoc-
Schutzgruppe (AAV 10), die Abspaltung der Allyl-Schutzgruppe (AAV 11b) und
schließlich die Cyclisierung mit PyAOP nach AAV 8.
Zur Analytik wurden kleine Mengen des Peptids entnommen und mit BrCN nach AAV
14 gespalten.
Fmoc-Trp-Gly-His-Pro-Gln-Glu[βAla-βAla-Phe(4Br)-Arg(Pbf)-Hsl]-OAll (61→ 62)
Analytische RP-HPLC (Nucleosil Säule): (20-100% B in 20 min, 1 ml/min) tR = 18,9 min
ESI-MS: 1930,6 m/z [M+H] + , 1678,7 m/z [(M-Pbf)+H] +
Berechnet: C92H113BrN19O21S + (1930,72 m/z)
H-Trp-Gly-His-Pro-Gln-Glu[βAla-βAla-Phe(4Br)-Arg(Pbf)-Hsl]-OH
ESI-MS: 1668,8 m/z [M+H] + , 1416,0 m/z [(M-Pbf)+H] +
Berechnet: C74H99BrN19O19S + (1668,62 m/z)
Cyclo[Trp-Gly-His-Pro-Gln-Glu(βAla-βAla-Phe(4Br)-Arg-Hsl)] (63→ 64)
Analytische RP-HPLC (Nucleosil Säule): (45-100% B in 20 min, 1 ml/min) tR = 11,1 min
ESI-MS: 1397,9 m/z [M+H] +
Berechnet: C61H83BrN19O16 + (1398,53 m/z)
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