Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.
YUMPU macht aus Druck-PDFs automatisch weboptimierte ePaper, die Google liebt.
8 Experimenteller Teil<br />
AAV 6 Bestimmung der Beladungsdichte<br />
Zur Bestimmung der Beladungsdichte wird eine kleine Menge Harz (3-5 mg) mit 20%<br />
Piperidin in DMF (10 ml) für 15 Minuten behandelt. Von der Lösung werden<br />
verschiedene Verdünnungen hergestellt und die UV-Absorption bei 301 nm in<br />
Küvetten mit einem Durchmesser von 1 cm gemessen. Über die Gleichung der<br />
Eichgeraden<br />
E = 0,0077·c<br />
mit E = Extinktion, c = Konzentration in µmol/l, wird die Konzentration der<br />
Abspaltlösung und darüber die Beladung berechnet.<br />
AAV 7 Festphasen-Peptidsynthese am Peptidsynthesizer ABI 433A<br />
Für den 20 µmol Ansatz werden folgende Lösungen verwendet. Die Zahlen geben<br />
die jeweiligen Flaschennummer am Synthesizer an; nicht erwähnte Flaschen-<br />
nummern bleiben leer:<br />
1) abs. Piperidin<br />
4) Cappinglösung:<br />
115 mg HOBt wird in ca. 40 ml NMP gelöst. 2,4 ml Acetanhydrid und<br />
1,1 ml DIPEA werden zugegeben. Anschließend wird die Lösung<br />
mit NMP auf 50 ml aufgefüllt.<br />
6) MeOH HPLC grade<br />
7) 1,6 M DIPEA in NMP:<br />
13,7 ml DIPEA werden mit 36,6 ml NMP gemischt.<br />
8) 0,38 M HOBt/HBTU in NMP:<br />
In einem Messzylinder werden 7,58 g (20 mmol) HBTU und 3,06 g (20 mmol) HOBt<br />
eingewogen und auf 50 ml mit NMP aufgefüllt. Anschließend wird solange gerührt,<br />
bis sich alles aufgelöst hat (ungefähr 10 Minuten).<br />
9) DCM, peptide grade<br />
10 und 11) NMP, peptide grade<br />
Die gleichen Lösungen werden auch für den 10 µmol Ansatz verwendet, lediglich in<br />
Flasche 7 befindet sich eine 0,8 M Lösung von DIPEA in NMP.<br />
122