Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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Xaa2<br />
Position<br />
Xaa3<br />
Xaa4<br />
Xaa5<br />
Xaa6<br />
Ala<br />
Gln<br />
Glu<br />
Gly<br />
His<br />
Phe<br />
7 Zusammenfassung und Ausblick<br />
Pro<br />
Aminosäure<br />
Abb. 7.6 Screening der Bibliothek K-X2X3X4X5X6E-βAPPRM-TG. Das Diagramm zeigt<br />
die möglichen Aminosäuren an unterschiedlichen Positionen der<br />
Peptidsequenz (farbige Markierung). Die Höhe der Balken gibt den<br />
prozentualen Anteil an, mit der die Aminosäure an der entsprechenden<br />
Position in den Hitbead-Peptidsequenzen gefunden werden konnte.<br />
Zur Bestätigung der Selektivität wurden SPR-Experimente durchgeführt. Hierzu<br />
wurden eine ausgesuchte Hitsequenz, eine Sequenz mit dem HPQ-Motiv in den<br />
Positionen 4-6, die sich nicht unter den Hits befand, sowie als Negativkontrolle eine<br />
modifizierte Hitsequenz mit QPH-Motiv in je linearer und cyclischer Form präparativ<br />
dargestellt. Im Falle der Hitsequenz zeigte das cyclische Peptid eine<br />
Bindungsaffinität zu Streptavidin von KD = 323 ± 24 µM, während das lineare Peptid<br />
um einen Faktor von 8,5 schlechter band. Dies belegt, dass durch die Cyclisierung<br />
ein Peptid in einer für die Bindung günstigen Konformation fixiert werden kann. Der<br />
umgekehrte Fall zeigt sich bei den Peptiden 94/95 mit HPQ-Motiv in den Positionen<br />
4-6. Hier wurde für die cyclische Form ein KD von 8,6 ± 2,7 mM bestimmt, der<br />
offensichtlich zu hoch war, um die Verbindung beim Bibliotheksscreening<br />
anzufärben. Das (nicht in der Bibliothek enthaltene) lineare Peptid zeigte eine fast<br />
fünffach bessere Bindung. In diesem Fall wird durch die Cyclisierung eine für die<br />
Ser<br />
Thi<br />
Trp<br />
10<br />
0<br />
40<br />
30<br />
20<br />
70<br />
60<br />
50<br />
100<br />
90<br />
80<br />
%<br />
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