Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
Erfolgreiche ePaper selbst erstellen
Machen Sie aus Ihren PDF Publikationen ein blätterbares Flipbook mit unserer einzigartigen Google optimierten e-Paper Software.
6 Synthese fluoreszenzmarkierter Phosphopeptide<br />
In Abb. 6.11 ist der Syntheseweg des fluoreszenzmarkierten Phosphopeptids<br />
SRBS-pY230 dargestellt. Aufgrund der Erfahrungen bei der Synthese von Peptid<br />
115 und SRBS-Y230 wurden nur die ersten fünf Aminosäuren der Peptidkette am<br />
Synthesizer verknüpft. Die weitere Synthese wurde manuell durchgeführt. Dabei<br />
wurden alle Fmoc-Abspaltschritte mittels UV-Spektroskopie und alle<br />
Kupplungschritte mittels Kaiser [142] - und TNBS [143] -Test auf ihre Vollständigkeit hin<br />
überprüft. Da sich in den vorhergehenden Synthesen die letzten beiden<br />
Kettenverlängerungsschritte (Arg und Pro) als problematisch erwiesen, wurde bei<br />
deren Kupplung das reaktivere PyAOP als Aktivierungsreagenz verwendet. [144] Die<br />
Einführung des Fluoreszenzlabels, die Abspaltung vom Harz, sowie die weitere<br />
Aufarbeitung erfolgte analog zu den bereits beschriebenen Peptiden SRBS-Y230,<br />
SRBS-pY241 und SRBS-Y241. Das fluoreszenzmarkierte Peptid SRBS-pY230<br />
wurde nach präparativer RP-HPLC mit einer Ausbeute von 14% erhalten.<br />
Fmoc-SPPS<br />
am ABI433A<br />
Fmoc<br />
N<br />
H<br />
O<br />
Wang<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 5eq. Xaa,<br />
5eq. HOBt/HBTU-Lsg,<br />
20eq. DIPEA<br />
3) Ac 2O/HOBt und DIPEA<br />
Fmoc-Glu(O t Bu)-Glu(O t Bu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(O t Bu)<br />
manuelle<br />
Fmoc-SPPS<br />
t BuO<br />
O<br />
114<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 5eq. Xaa<br />
5eq. PyBOP/HOBt-Lsg,<br />
10eq. DIPEA<br />
3) 10% Ac 2OinDMF<br />
Fmoc-Thr( Wang<br />
tBu)-Ala-Ala-Ser( Me,MePro)-Ile-Tyr[PO(OBzl)]-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 123<br />
manuelle<br />
Fmoc-SPPS<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 5eq. Fmoc-Arg(Pbf)-OH<br />
5eq. PyAOP/HOAt-Lsg,<br />
10eq. DIPEA<br />
3) 10% Ac 2OinDMF<br />
Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr( Wang<br />
tBu)-Ala-Ala-Ser( Me,MePro)-Ile-Tyr[PO(OBzl)]-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 124<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 4eq. SRBS-Chlorid<br />
6eq. DIPEA<br />
3) Reagenz K<br />
Wang<br />
122<br />
SRBS-Pro-Arg-Thr-Ala-Ala-Ser-Ile-Tyr[PO(OH) 2]-Glu-Glu-Leu-Leu-Lys-His-Asp-OH<br />
SRBS-pY230<br />
Abb. 6.11 Syntheseweg des fluoreszenzmarkierten Phosphopeptids SRBS-pY230.<br />
107