Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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Fmoc-SPPS<br />
am ABI433A<br />
Fmoc<br />
N<br />
H<br />
O<br />
6 Synthese fluoreszenzmarkierter Phosphopeptide<br />
Wang<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 5eq. Xaa,<br />
5eq. HOBt/HBTU-Lsg,<br />
20eq. DIPEA<br />
3) Ac 2O/HOBt und DIPEA<br />
Fmoc-Ile-Tyr( t Bu)-Glu(O t Bu)-Glu(O t Bu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(O t Bu)<br />
Fmoc NH<br />
O<br />
N<br />
O<br />
O<br />
t BuO<br />
O<br />
manuelle<br />
Fmoc-SPPS<br />
Fmoc-Pro-Arg(Pbf)-Thr( Wang<br />
tBu)-Ala-Ala-Ser( Me,MePro)-Ile-Tyr( tBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 121<br />
114<br />
Wang<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 5eq. Fmoc-Ala-Ser( Me,Me Pro)-OH<br />
5eq. PyBOP/HOBt-Lsg,<br />
10eq. DIPEA<br />
3) 10% Ac 2OinDMF<br />
Ile-Tyr( Wang<br />
tBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-His(Trt)-Asp(OtBu) 120<br />
Fmoc-SPPS<br />
am ABI433A<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 5eq. Xaa,<br />
5eq. HOBt/HBTU-Lsg,<br />
20eq. DIPEA<br />
3) Ac 2O/HOBt und DIPEA<br />
1) 20% Piperidin<br />
2) 4eq. SRBS-Chlorid<br />
6eq. DIPEA<br />
3) Reagenz K<br />
SRBS-Pro-Arg-Thr-Ala-Ala-Ser-Ile-Tyr-Glu-Glu-Leu-Leu-Lys-His-Asp-OH SRBS-Y230<br />
Abb. 6.9 Synthese des fluoreszenzmarkierten Peptids SRBS-Y230 unter Verwendung<br />
eines Pseudoprolin-Dipeptids. Zur besseren Steuerung der Synthese wurde<br />
das Peptid teilweise manuell synthetisiert.<br />
Der Syntheseweg ist in Abb. 6.9 aufgeführt. Die ersten neun Aminosäuren der<br />
Peptidkette wurden, wie bereits beschrieben, am Synthesizer verknüpft. Die<br />
darauffolgende Abspaltung der N-terminalen Fmoc-Schutzgruppe von Peptid 119<br />
erfolgte manuell. Die Vollständigkeit der Entschützungsreaktion wurde mittels UV-<br />
Spektroskopie überprüft. Anschließend wurde, ebenfalls manuell, das Pseudoprolin-<br />
Dipeptid durch PyBOP/HOBt-Aktivierung gekuppelt. Auch dieser Reaktionsschritt<br />
wurde auf seine Vollständigkeit hin überprüft. Hierzu wurden der Kaiser [142] - und<br />
TNBS [143] -Test durchgeführt. Nach zusätzlicher Acetylierung wurde die Synthese in<br />
automatisierter Form fortgesetzt. Leider zeigt sich im UV-Monitoring erneut ein<br />
Syntheseeinbruch zwischen Thr und Arg (ähnlich wie in Abb. 6.7 Einbruch II).<br />
Unmittelbar nach der Synthese am Synthesizer wurde eine Testabspaltung von 121<br />
119<br />
105