Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz
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6 Synthese fluoreszenzmarkierter Phosphopeptide<br />
Phosphoramidit 103 bildet sich unter leicht sauren Bedingungen (Tetrazol) zunächst<br />
ein Phosphittriester-Intermediat 104. Das Phosphoratom liegt hierbei als P III vor und<br />
muss im nächsten Schritt zum Phosphorsäuretriester 105 mit P V oxidiert werden.<br />
Gebräuchliche Oxidierungsmittel hierfür sind meta-Chlorperbenzoesäure (mCPBA),<br />
tert-Butylhydroxyperoxid und wässrige Jodlösung. Während der Oxidation kann es<br />
leicht zu Nebenreaktionen, wie der Oxidation in den Seitenketten von Cystein,<br />
Methionin und Tryptophan, kommen. Phosphoramidite sind reaktiver als<br />
Phosphorchloridate und werden bei Weitem häufiger verwendet. [127]<br />
Abb. 6.2 Fmoc-Tyr[PO(OBzl)OH]OH 107, der gebräuchlichste Baustein für<br />
Phosphotyrosin beinhaltende Peptide in der Standard-Fmoc-SPPS.<br />
Bedient man sich bereits phosphorylierter Aminosäurederivate, welche mit Schutz-<br />
gruppen versehen sind als Bausteine in der Peptidsynthese, so umgeht man die<br />
Problematik der Oxidation und der Phosphorylierung aller freien Hydroxygruppen.<br />
Die Phosphat-Gruppe wird durch den Gebrauch von Schutzgruppen maskiert, um die<br />
Bildung von Pyrophosphat und Dephosphorylierungen zu verhindern. [128] Bei der<br />
Darstellung von Phosphotyrosin beinhaltenden Peptiden ist der Einsatz von Fmoc-<br />
Tyr[PO(OBzl)OH)]-OH am gebräuchlichsten (Abb. 6.2). Die Benzylgruppe lässt sich<br />
leicht einführen und kann durch Behandlung mit TFA, parallel mit den anderen<br />
säurelabilen Schutzgruppen, schnell entfernt werden. Gewöhnlich finden nur<br />
Monobenzylester Verwendung in der Fmoc/t-Bu SPPS. Dibenzylester bringen keinen<br />
Vorteil, da sie bei der Behandlung mit Piperidin (Fmoc-Entschützen) zu<br />
Monobenzylester umgewandelt werden. [129] Das Einbringen einer<br />
Phosphoaminosäure ist eine schwerwiegende Veränderung in der Sequenz des<br />
Peptids. Peptidsequenzen, die ohne Phosphorylierung leicht zu synthetisieren waren,<br />
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