Angelika Semmler - KOPS - Universität Konstanz

5 Anwendung der Methode
5.5.2 SPR-Experimente
Die Oberflächen-Plasmonen-Resonanzspektroskopie [124, 125] (SPR-Spektroskopie) ist
eine wichtige Methode zur Messung von Bindungskonstanten der Interaktion zweier
Biomoleküle. [45]
Kommerziell erhältliche Systeme werden von der Firma Biacore (Uppsala,
Schweden) hergestellt. Kernstück der Anlage ist eine Fließkammer mit optischer
Einheit und angrenzendem austauschbarem Sensor-Chip. Zur Messung der
Bindungskonstante ist einer der Bindungspartner auf der Oberfläche des Sensor-
chips immobilisiert (Ligand), während eine Probe des anderen Bindungspartners
über ein Mikrofluidik-Kanalsystem geleitet wird. Ändert sich durch Bindung von
Molekülen die Massen-Konzentration und damit der Brechungsindex an der
Oberfläche, wird dies als SPR-Antwort gemessen und graphisch als Funktion der
Zeit in einem Sensorgramm dargestellt. Ein Vorteil dieser Methode ist, dass die
Messung der Interaktion von Biomolekülen ohne Markierung, wie zum Beispiel
Fluoreszenz-Label, in Real-Zeit erfolgen kann. Die Biacore-Technik erlaubt dabei
nicht nur Messungen von Affinitäten im Gleichgewicht (KD- bzw. KA), sondern auch
die Messung von Geschwindigkeitskonstanten für den Assoziations- bzw. Dis-
soziationsschritt (koff bzw kon). Ein weiterer Vorteil der Methode ist ihre hohe
Sensitivität, womit für eine Messung nur geringe Mengen an Probe benötigt
werden. [126]
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Abb. 5.11 a) Aufbau des SPR-Systems. b) Abfall der Intensität des reflektierten Lichts
durch SPR-Anregung in Abhängigkeit des Einfallswinkels. [126]