Dissertation Carolin Grundgeiger - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

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Material und Methoden
2.6.4 Sonstige Auswertungsmethoden
2.6.4.1 Bestimmung der Zelldichte und Proliferationsrate
Die Zelldichte und die Proliferationsrate wurde an den PCNA-gefärbten
Aortenbogensegmenten II und III bestimmt. Die Fotografien an den vier
diametral gelegenen Stellen wurden nicht mit dem 10fach, sondern dem 20fach
Objektiv erstellt, da sie zum Teil manuell ausgewertet werden mussten. Die
Plaque wurde im Bildbearbeitungsprogramm Adobe Photoshop 7.0
ausgeschnitten. Mit dem Analyseprogramm ImageJ wurde die Plaque-
fläche (mm 2 ) und die Gesamtzellzahl bestimmt. Aus diesen Daten wurde die
Zellzahl pro mm 2 errechnet. Zur weiteren Auswertung wurden die vier Bilder
tonwertkorrigiert (Kap. 2.6.3.1) ausgedruckt. Die rötlich gefärbten,
PCNA-positiven Zellkerne wurden manuell ausgezählt und zur Gesamtzahl der
Zellkerne ins Verhältnis gesetzt. Der Anteil der positiven Zellen ergab die
Proliferationsrate.
2.6.4.2 Bestimmung des Anteils an NFκB-positiven Zellen
Die rot angefärbten NFκB-positiven Zellen wurden unter dem Mikroskop mit
dem 40fachen Objektiv mit Immersionsöl ausgezählt. Die Ergebnisse von
jeweils zwei Zählungen wurden gemittelt. Bereiche mit Artefakten wurden von
der Auswertung ausgeschlossen. Aus der morphometrisch bestimmten
Plaquefläche (Kap. 2.6.2.1) und der Zelldichte (Kap. 2.6.4.1) wurde die
Gesamtzellzahl ermittelt und der prozentuale Anteil NFκB-positiver Zellen an
der Gesamtzellzahl berechnet.