Dissertation Carolin Grundgeiger - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

Material und Methoden 17
erscheinen rötlich. Diese Färbung wurde an den Segmenten II und III des
Aortenbogens angefertigt.
Die entparaffinierten Schnitte wurden bei Tageslicht 10-20 min in eine 5%ige
wässrige Silbernitratlösung gegeben und anschließend mit Aqua dest. gespült.
Die Fixierung erfolgte 2 min in 5%iger Natriumthiosulfatlösung. Nach
wiederholter Spülung mit Aqua dest. wurden die Zellkerne 3 min lang mit
Kernechtrot-Aluminiumsulfat gegengefärbt. Vor der Einbettung in Vitro Clud®
(Langenbrinck, Emmedingen) erfolgte eine weitere Spülung und Entwässerung.
2.5.3.3 Ölrot-Färbung
Mit der Ölrot-Färbung werden Lipide dargestellt. Diese erscheinen rosa,
Zellkerne blau und das Zytoplasma schwach bläulich.
Die Kryostatschnitte wurden 5 min in Isopropanol (50%ig) gegeben und
anschließend für 10 min mit frisch filtrierter Ölrot-Lösung (100 ml 98%iges
Isopropanol + 0,5 g Ölrot + 65 ml Wasser; Certastain® Ölrot, Nr. 5230, Merck,
Darmstadt) gefärbt. Nach Spülung mit Isopropanol (50%ig) und Aqua dest.
folgte eine 7-minütige Färbung in Hämalaun-Lösung (Merck, Darmstadt). Unter
fließendem Wasser wurden die Schnitte 10 min gebläut und in Mowiol (12 g
Mowiol 4-88, Hoechst AG, Frankfurt, in 30 ml Aqua bidest., mit 0,2 M TRIS-
HCl-Puffer auf pH 8,5 titriert, Zugabe von 30 g Glycerin) eingebettet.
2.5.4 Immunhistochemische Färbungen
In der Immunhistochemie werden mit Hilfe spezifischer Antikörper bestimmte
Epitope von Zellen und Zellbestandteile dargestellt. Bei der hier verwendeten
indirekten Methode wird nicht der Primärantikörper detektiert, sondern ein
enzymkonjugierter Sekundärantikörper.
Es wurden folgende immunhistochemische Färbungen angefertigt: RAM-11,
α-Aktin, Endothelin-1, Kollagen Typ I und III, PCNA und Anti-NFκB.