Dissertation Carolin Grundgeiger - TOBIAS-lib - Universität Tübingen
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Material und Methoden 17<br />
erscheinen rötlich. Diese Färbung wurde an den Segmenten II und III des<br />
Aortenbogens angefertigt.<br />
Die entparaffinierten Schnitte wurden bei Tageslicht 10-20 min in eine 5%ige<br />
wässrige Silbernitratlösung gegeben und anschließend mit Aqua dest. gespült.<br />
Die Fixierung erfolgte 2 min in 5%iger Natriumthiosulfatlösung. Nach<br />
wiederholter Spülung mit Aqua dest. wurden die Zellkerne 3 min lang mit<br />
Kernechtrot-Aluminiumsulfat gegengefärbt. Vor der Einbettung in Vitro Clud®<br />
(Langenbrinck, Emmedingen) erfolgte eine weitere Spülung und Entwässerung.<br />
2.5.3.3 Ölrot-Färbung<br />
Mit der Ölrot-Färbung werden Lipide dargestellt. Diese erscheinen rosa,<br />
Zellkerne blau und das Zytoplasma schwach bläulich.<br />
Die Kryostatschnitte wurden 5 min in Isopropanol (50%ig) gegeben und<br />
anschließend für 10 min mit frisch filtrierter Ölrot-Lösung (100 ml 98%iges<br />
Isopropanol + 0,5 g Ölrot + 65 ml Wasser; Certastain® Ölrot, Nr. 5230, Merck,<br />
Darmstadt) gefärbt. Nach Spülung mit Isopropanol (50%ig) und Aqua dest.<br />
folgte eine 7-minütige Färbung in Hämalaun-Lösung (Merck, Darmstadt). Unter<br />
fließendem Wasser wurden die Schnitte 10 min gebläut und in Mowiol (12 g<br />
Mowiol 4-88, Hoechst AG, Frankfurt, in 30 ml Aqua bidest., mit 0,2 M TRIS-<br />
HCl-Puffer auf pH 8,5 titriert, Zugabe von 30 g Glycerin) eingebettet.<br />
2.5.4 Immunhistochemische Färbungen<br />
In der Immunhistochemie werden mit Hilfe spezifischer Antikörper bestimmte<br />
Epitope von Zellen und Zellbestandteile dargestellt. Bei der hier verwendeten<br />
indirekten Methode wird nicht der Primärantikörper detektiert, sondern ein<br />
enzymkonjugierter Sekundärantikörper.<br />
Es wurden folgende immunhistochemische Färbungen angefertigt: RAM-11,<br />
α-Aktin, Endothelin-1, Kollagen Typ I und III, PCNA und Anti-NFκB.