Dissertation Carolin Grundgeiger - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

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Material und Methoden
2.5.2 Herstellung von Kryostatpräparaten
Die zwei für die Ölrot-Färbung vorgesehenen Gefäßsegmente AoBo I und
Thor V eines jeden Tieres wurden nach der Perfusionsfixierung bis zur weiteren
Verarbeitung in Formalinlösung gelagert. Nach der Einbettung in Tissue-Tek®
(10,24 % Polyvinylalkohol, 4,26 % Polyethylenglycol, 85,5 % nichtreaktive
Bestandteile, Sakura Finetek Europe B. V., Zoeterwoude, Niederlande), wurden
mit einem Gefriermikrotom (Mod. 2700-Frigocut, Reichert-Jung, Nussloch)
10 µm dicke Schnitte angefertigt, auf Superfrost/Plus-Objektträger
(Langenbrinck, Emmendingen) aufgetragen und anschließend gefärbt.
2.5.3 Histologische Färbungen
2.5.3.1 Elastica van Gieson-Färbung (EvG-Färbung)
Die Elastica van Gieson-Färbung dient zur morphometrischen Beurteilung der
Präparate und zur Bestimmung der Plaquefläche. Elastische Fasern stellen
sich dunkelviolett bis schwarz dar, Bindegewebe leuchtend rot und Muskulatur
gelb.
Die entparaffinierten Gefäßschnitte wurden 30 min mit Resorcinfuchsin
(Chroma Gesellschaft, Köngen) gefärbt, mit 80%igem Alkohol und Wasser
gespült und für 6 min mit Eisenhämatoxylin nach Weigert (Chroma
Gesellschaft, Köngen) behandelt. Nach Differenzierung in HCl-Alkohol wurden
die Schnitte unter fließendem Leitungswasser 10 min gebläut und nach
erneutem 2-minütigem Spülen in van Gieson-Lösung (Chroma Gesellschaft,
Köngen) belassen. Nach erneuter Entwässerung in einer aufsteigenden
Alkoholreihe wurden die gefärbten Präparate kurz in Xylol getaucht und in Vitro
Clud ® (Langenbrinck, Emmendingen) eingebettet.
2.5.3.2 Silbernitratfärbung nach von Kossa
Die Silbernitratfärbung nach von Kossa wird zur Bestimmung kalziumhaltiger
Bereiche herangezogen. Diese färben sich braun-schwarz an, Zellkerne