Dissertation Carolin Grundgeiger - TOBIAS-lib - Universität Tübingen

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Material und Methoden
2.5 Anfertigung histologischer und immunhistochemischer
Präparate
Von den entnommenen Gefäßsegmenten und Organen wurden Paraffin- und
Kryostatpräparate angefertigt und für histologische und immunhistochemische
Färbungen verwendet.
2.5.1 Herstellung von Paraffinpräparaten
Nach der Entnahme wurden die Gefäßsegmente und Organproben für 24 h in
5%iger Formalinlösung fixiert. Nach Abpräparieren von eventuell noch
vorhandenem Bindegewebe wurden die Präparate in einer aufsteigenden
Alkoholreihe (70-99 %) entwässert. Anschließend wurden die Präparate für 1 h,
15 h, und für mindestens 24 h in Methylbenzoat® (Merck, Darmstadt), dann
zweimal für 10 min in Rotihistol® (Roth, Karlsruhe) und schließlich in Paraffin
(Paraplast®, Sherwood, St. Louis, USA) für 1 h, 5 h und 24 h überführt.
Abschließend wurden die Gefäße in 0,5-1 cm große Abschnitte unterteilt
(Abb. 3) und in Paraffin eingebettet. Mit einem Mikrotom (Jung RM 2045, Leica,
Bensheim) wurden 4 µm dicke Schnitte angefertigt. Bis auf die Ölrot-Färbung
wurden alle histologischen und immunhistochemischen Färbungen an
Paraffinschnitten durchgeführt.