Dot Blot 96

Dot Blot 96 System (Best.-Nr. 053-400/490/491)Dot Blot 96 (Best.-Nr. 053-401)HandbuchJanuar 2001!! Achtung !!Bitte lesen Sie das Handbuch sorgfältigbevor Sie mit dem Gerät arbeiten!Biometra biomedizinische Analytik GmbHRudolf-Wissell-Str. 30D-37079 Göttingen Service DepartmentPostfach 1544 Rudolf-Wissell-Str. 14-16D-37005 Göttingen D-37079 GöttingenTel: ++49 – (0)5 51 / 50 68 6-0 Tel.: ++49 – (0)5 51 / 50 88 1-10Fax: ++49 – (0)5 51 / 50 68 6-66 Fax.: ++49 – (0)5 51 / 50 88 1-11e-mail: info@biometra.co.ukinternet: http://www.biometra.de

BestellinformationenArtikelBest.-Nr.Dot Blot 96 System mit Vakuumpumpe (s.u.), 230 V 053-400Dot Blot 96 System mit Vakuumpumpe (s.u.), 115 V, 60 Hz 053-490Dot Blot 96 System mit Vakuumpumpe (s.u.), 100 V, 50/60 Hz 053-491Dot Blot 96 ohne Vakuumpumpe 053-401Membranpumpe (Vakuumpumpe) MP86 mit Feinregulierventil undManometer (max. Förderleistung 6 l/min, Endvakuum 100 mbar), 230 Vdto. 115 V, 60 Hzdto. 100 V, 50/60 Hz049-000049-090049-091Zubehör:Silikon Dichtungsmatte 053-410Schrauben ( 2 Stück) 014-013Vakuumschlauch, 1m 049-001Blotting Papier25 Stück/Pckg, 29,7cm x 21cm (Dicke: 0,9mm) 092-002(Filter Papier)Whatman 3MM Papier 100 Stück/Pckg, 58cm x 68cm 3030 931Nitrocellulose Blottingmembran 1 Rolle, 30cm x 3m (Porengröße: 0,45μm) 090-0023

2.0 Sicherheits- und AnwendungshinweiseAchtung!Verwenden Sie keine organischen Lösungsmittel oder Lösungen mitchaotropen Ionen zur Reinigung!Lösungsmittelbeständigkeit: Verwenden Sie keine organischen Lösungsmittel (z.B: Aceton,Chloroform, > 30% Ethanol)Verwenden Sie keine chaotropen Ionen (z.B.: Harnstoff,Guanidinium-Hydrochlorid)Reinigung: Detergenzlösung oder0,1 n NaOH-Lösung oderverdünnte alkoholische Lösung (≤ 30 %)Vakuum:Maximal 500 mbar unter AtmosphärendruckProbenvolumen je Bohrung: 350 μlFilterplatten-Fläche:9 x 12,5 cm4

3.0 Installation3.1 Auspacken und KontrollierenSie erhalten den Dot Blot 96 bzw. das Dot Blot 96 System sorgfältig verpackt. Bitte packenSie die Geräte vorsichtig aus, überprüfen Sie die Lieferung auf Vollständigkeit undkontrollieren Sie sowohl die Geräte als auch das Zubehör. Beanstandungen sind unverzüglichan BIOMETRA zu melden.Versuchen Sie niemals mit einem Gerät zu arbeiten, welches nicht in ordnungsgemäßemZustand ist.Falls Sie eine Beanstandung haben, schicken Sie das System unter Beachtung derRücksendungsinstruktionen (siehe Kapitel 8.0) komplett in der Originalverpackung zurück.!! Achtung !!Bitte schicken Sie die beiliegende Postkarte mit dem Garantiezertifikat / WarrantyCertificate ausgefüllt an Biometra zurück, damit Sie die volle Garantie in Anspruchnehmen können!4.0.0 PlazierungStellen Sie die Blottingeinheit grundsätzlich so, daß Sie den optimalen Abstand zu der vonIhnen verwendeten Vakuumpumpe haben. Vergewissern Sie sich vor Inbetriebnahme, daß dieGeräte sicher und an einem trockenen Platz stehen.Stellen Sie die Geräte niemals an die Kante der Arbeitsfläche.Setzen Sie das System nicht der direkten Sonneneinstrahlung aus.5

5.0 Montage der TransfereinheitÜberprüfen Sie vor jeder Anwendung ob alle von Ihnen verwendeten Bohrungenfrei passierbar sind. Überprüfen Sie dabei alle drei Elemente: Filterplatte, SilikonDichtungsmatte und Deckplatte.Bevor Sie eine Membran in die Dot Blot-Apparatur einsetzen, beachten Sie dieHerstellerangaben zur Vorbehandlung des von Ihnen verwendeten Filtermaterials.1. Schrauben Sie den Schlauchadaptor in das Gehäuse der Auffangwanne. Sie können dieVakuumpumpe entweder direkt oder über eine zwischengeschaltete Waschflasche an dieDot Blot-Apparatur anschließen.Eine Waschflasche ist bei Arbeiten mit radioaktiven Stoffen oder bei sehr salzhaltigenLösungen (z.B.: 10x SSC) zu empfehlen.2. Setzen Sie die Filterplatte in die Auffangwanne.3. Legen Sie entsprechend der Orientierung der Kontrollstifte die Gummimatte auf dieFilterplatte auf. Die 96 Bohrungen der Gummimatte müssen mit den 96 Bohrungen derFilterplatte genau übereinstimmen.Nicht benötigte Bohrungen können Sie durch passend zurechtgeschnittene Parafilm-Streifen verschließen, die Sie im gewünschten Bereich auf die Gummimatte legen.4. Setzen Sie auf die Gummimatte ein passend zurechtgeschnittenes und in Pufferlösungäquilibriertes Whatman 3MM-Filterpapier. Verwenden Sie als Pufferlösung dieWaschlösung, mit der Sie während des Blot-Vorganges waschen werden.5. Die entsprechend ihrem Probenbedarf vorgeschnittene und in Pufferlösung äquilibrierteMembran wird auf das Filterpapier gelegt. Wählen Sie die Größe der Membran so, daß dieKontrollstifte auf der Filterplatte ausgespart bleiben, da es ansonsten zu Brüchen in derMembran kommt.Entfernen Sie alle Luftblasen zwischen Membran, Filterpapier und Gummimatte,indem Sie mit einer Glaspipette o.ä. über die Membran rollen.6. Setzen Sie entsprechend der Orientierung der Kontrollstifte die Deckplatte mit demPufferreservoir auf die Filterplatte.7. Ziehen Sie zuerst zwei gegenüberliegende Schrauben an, dann die beiden anderenSchrauben.Ziehen Sie die Schrauben per Hand - ohne Einsatz von Hilfsmitteln - fest.8. Legen Sie Vakuum an die Transfereinheit an und ziehen Sie bei Bedarf die Schraubenerneut an. Überprüfen Sie ihr Vakuum indem Sie in einige (oder alle) BohrungenPufferlösung pipettieren und über die Membran filtrieren.6

DeckelMembranSchraubeWhatman 3MM FilterpapierSilikonmatteAuflageAuffangwanneVakuumanschlußAbb. 1: Querschnittzeichnung des Dot Blot 96 und Darstellung des Aufbaus eines Dot Blots6.0 Demontage der Transfereinheit1. Unterbrechen Sie das Vakkum bevor Sie die Schrauben öffnen. Bei Verwendung der zumSystem gehörigen Vakummpumpe (Best.-Nr. 049-000/090/091) kann Umgebungsdruckdurch öffnen des Feinregulierventils erreicht werden.2. Entfernen Sie den Transferpuffer aus dem oberen Puffer Reservoir. Danach kann dieTransfereinheit in umgekehrter Reihenfolge wie beim Zusammenbau auseinander gebautwerden.3. Spülen Sie alle Teile des Dot Blot 96 nach Gebrauch mit dest. Wasser. Achten Sie beimreinigen auf die Hinweise in Kapitel “2.0 Sicherheits- und Anwendungshinweise”.7

7.0 Applikationshinweise7.1 MembraneigenschaftenMembrantyp Bindung von Bindungstyp bevorzugte AnwendungNitrozellulose DNA, RNA, Protein hydrophobe B. Protein-Blotelektrostatische B.Nylon DNA, RNA, Protein hydrophobe B. DNA-, RNA-Blotelektrostatische B.DEAE 1 -Cellulose Protein ionische B. präparativer Protein-BlotPVDF 2 -Membran Protein hydrophobe B. Protein-BlotProtein-SequenzierungDBM 3 -Cellulose DNA, RNA, Protein elektrostatische B. DNA-, RNA-BlotDPT 4 -Cellulosekovalente B.1 DEAE: Diethylaminoethyl; 2 PVDF: Polyvinylidendifluorid;3 DBM: Diazobenzyloxymethyl; 4 DPT: Diazophenylthioether.7.2 Immunblot-AnwendungenVerwenden Sie für Ihre „blocking“-Lösung kein Gelatin, da Gelatin die Membranundurchlässig macht. Geeignete Reagenzien sind u.a. BSA oder Ovalbumin!Beachten Sie die maximale Bindungskapazität Ihrer Membran während desProbenauftrages, da es ansonsten zum Verschluß der Membran kommt. Ist dieZusammensetzung und Konzentration Ihrer Probe unbekannt, führen Sie erst eineVerdünnungsreihe mit dem Dot Blot 96 durch.Lassen Sie die Membran während der einzelnen Inkubations- oder Waschschritte nievollständig austrocknen.Bei Verwendung der mitgelieferten Vakuumpumpe belüften Sie den Dot Blot 96 beilaufender Pumpe durch Aufdrehen des schwarzen Rändelrades am Manometer.Durch Zudrehen des Rändelrades legen Sie erneut Vakuum an die Dot Blot-Apparaturan.1. Bei Verwendung von Nitrozellulose-Filtern, äquilibrieren Sie die Membran für5 - 10 min in der Pufferlösung, die Sie zum Waschen Ihrer Proben verwenden2. Spülen Sie nach dem Zusammensetzen der Apparatur (siehe 5.) die Membranmit Pufferlösung.Spülen:Vakuum an3. Pipettieren Sie Ihre Proben in die einzelnen Bohrungen Probenzugabe:Vakuum aus8

Filtrieren Sie die Proben mittels schwachem Vakuum für ca. 30 min über dieMembran. Ist das Probenvolumen größer als 350 μl verlängert sich dieFiltrationszeit entsprechend.Saugen Sie die in den Bohrungen verbliebene Flüssigkeit vollständig ab.Filtration:Vakuum an4. Waschen Sie die Membran mindestens zweimal mit Waschlösung. Waschen:Vakuum an5. Pipettieren Sie Ihre „blocking“-Lösung in die Bohrungen „Blocking“:Vakuum ausFiltrieren Sie die „blocking“-Lösung mittels schwachem Vakuum für ca. 30 min Filtration:durch die Membran.Vakuum anSaugen Sie die in den Bohrungen verbliebene Flüssigkeit vollständig ab.6. Waschen Sie die Membran mindestens zweimal mit Waschlösung. Waschen:Vakuum an7. Pipettieren Sie den primären, spezifischen Antikörper in die Bohrungen 1. Ak-Zugabe:Vakuum ausFiltrieren Sie die Antikörper-Lösung mittels schwachem Vakuum für ca. 30 min Filtration:durch die Membran.Vakuum an8. Waschen Sie die Membran mindestens zweimal mit Waschlösung. Waschen:Vakuum an9. Pipettieren Sie den sekundären Antikörper in die Bohrungen. 2. Ak-Zugabe:Vakuum aus.Filtrieren Sie die Antikörper-Lösung mittels schwachem Vakuum für ca. 30 min Filtration:durch die Membran.Vakuum an10. Waschen Sie die Membran mindestens zweimal mit Waschlösung Waschen:Vakuum an11. Entnehmen Sie die Membran aus dem Dot Blot 96, um die weiterenReaktionsschritte zum Nachweis der Proben durchzuführen.Setzen Sie dieses Arbeitsschema auch für folgende Blot Nachweise ein:Glykoprotein - Lektin - WechselwirkungRezeptor - Ligand - Wechselwirkung.9

7.3 DNA-und RNA-Dot BlotBeachten Sie, daß Nitrozellulose bzw. Nylon bei unterschiedlichen SalzkonzentrationenNukleinsäuren binden. Wählen Sie Ihre Auftrags- und Waschlösungentsprechend der von Ihnen verwendeten Membran.1. Äquilibrieren Sie für ca. 30 min Ihre Membran in der Auftragslösung, bevorSie sie in den Dot Blot 96 einbauen.2. Nach dem Aufbau der Transfereinheit (siehe 5.) spülen Sie zweimal dieBohrungen mit Waschlösung. Lassen Sie ein geringes Volumen Waschlösung inden Bohrungen stehen.3. Pipettieren Sie die vorbereiteten, in Auftragslösung verdünnten Proben in dieBohrungen.Filtrieren Sie die Proben mittels schwachem Vakuum für ca. 30 min durch dieMembran.Spülen:Vakuum anProbenzugabe:Vakuum ausFiltration:Vakuum an4. Waschen Sie die Membran mindestens zweimal mit Waschlösung. Waschen:Vakuum an5. Nach Durchfluß der Waschlösung halten Sie weitere 5 min das Vakuumaufrecht um die Membran zu trocken.Trocknen:Vakuum an6. Entfernen Sie die Membran aus der Dot Blot 96- Apparatur und lassen Sie sievollständig bei RT trocknen.Die weitere Behandlung der Membran (Fixierung, Prä-Hybridisierung, Hybridisierung) istidentisch zu üblichen „Northern“ oder „Southern“-Protokollen.10

8.0 ServiceSollten Sie Probleme mit dem Gerät haben, setzen Sie sich bitte mit unserer Serviceabteilungbzw. dem für Sie zuständigen lokalen Biometra Händler in Verbindung:Biometra biomedizinische Analytik GmbHServiceabteilungRudolf-Wissell-Str. 14 - 14D-37079 GöttingenTel.: 05 51 / 50 88 1 - 10Fax: 05 51 / 50 88 1 - 11Falls Sie das Gerät an uns zurücksenden möchten, beachten Sie bitte unsereRücksendungsinstruktionen:Rücksendungsinstruktionen♦ Senden Sie nur fehlerhafte Geräte zurück. Bitte wenden Sie sich bei technischenProblemen, die nicht eindeutig als Gerätefehler erkennbar sind, vor Einsendung an dentechnischen Service von Biometra.♦ Benutzen Sie für den Versand die Originalverpackung oder eine ähnlich robusteVerpackung.♦ Kennzeichnen Sie die Verpackung äußerlich mit „CAUTION! SENSITIV ELECTRONICINSTRUMENT!“ oder " VORSICHT! HOCHEMPFINDLICHE ELEKTROGERÄTE".♦ Bitte legen Sie eine präzise Fehlerbeschreibung bei, die möglichst auch aufzeigt, beiwelchen Prozeduren der Fehler auftritt bzw. entstanden ist.♦ Wichtig:Reinigen Sie alle Teile des Gerätes von Rückständen, sowie biologisch gefährlichen,chemischen und radioaktiven Verunreinigungen. Bitte bestätigen Sie bei jederEinsendung schriftlich, daß das Gerät frei von biologisch gefährlichen undradioaktiven Kontaminationen ist. Bei verunreinigten Geräten verweigert Biometradie Annahme des Gerätes!♦ Für eventuelle Schäden infolge mangelhafter Entseuchung des Gerätes haftet derAbsender des Reparaturauftrages.♦ Bitte legen Sie eine Notiz bei, die folgendes enthält:a) Name und Adresse des Absendersb) Ansprechpartner und Telephon-Nr. für evtl. Rückfragen11

DekontaminationsbescheinigungUm eine Gefährdung von Mitarbeitern während der Reparatur- oder Wartungsarbeiten ausschließenzu können, bitten wir Sie folgendes auszufüllen und zu bestätigen. Insbesondere verweisen wir aufdie §§ 28 und 80 Strahlenschutzverordnung, §17 Gefahrstoffverordnung und § 19 Chemikaliengesetz.FIRMA / INSTITUT _________________________________________________________________________ADRESSE_________________________________________________________________________________TEL Nr ____________________________________ FAX Nr ____________________________________E-MAIL ___________________________________________________________________________________PRODUKT Modell Serien-Nr________________________________________________________________________________________________________________Falls als Leih-/Probestellgerät: Beginn (Datum): ____________Ende (Datum): ____________Gesundheitsgefährdende Substanzen („Gefahrstoffe“), die mit diesem Produkt benutzt wurden:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Das Produkt wurde gereinigt und ggf. dekontaminiert(bei Verwendung radioaktiver Substanzen ein Wischtest-Protokoll beifügen!)Art der Reinigung/ Dekontamination:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Mit der Unterschrift wird bestätigt, daß das Produkt frei von Kontaminationen ist. Falls die Dekontaminationunzureichend durchgeführt wurde, wird mit der Unterschrift akzeptiert, daß die damit verbundenen Folgekosten(z.B. Dekontamination durch eine Fachfirma, bzw. Entsorgung des Produktes als radioaktiver Abfall durch eineFachfirma) zu Lasten des Verursachers gehen.Name: ____________________________(Leiter des Institutes/ Abt./ Firma)Stellung in Fa./Institut: __________________________Unterschrift: ______________________________Datum: _________________________________Bitte senden Sie dieses Formular zusammen mit dem Produkt an Biometra Göttingen oder an IhrenBiometra-Außendienstmitarbeiter.Bitte bringen Sie dieses Formular ausgefüllt an der Außenseite der Verpackung an.Produkte ohne dieses Formular werden kostenpflichtig an den Absender zurückgeschickt.12

9.0 Notizen__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________13

GarantieDieses Biometra Produkt wurde sorgfältig hergestellt und die Qualität vor der Auslieferunggründlichst kontrolliert. Biometra garantiert, daß dieses Produkt den im Handbuchangegebenen Spezifikationen entspricht. Biometra gewährt eine Garantie von 12 Monaten auffehlerhafte Teile unter folgenden Bedingungen:Die Garantie ist gültig für 12 Monate ab dem Tag der Auslieferung an den Besteller durchBiometra oder einen autorisierten Händler. Die Garantie kann ohne schriftlichesEinverständnis von Biometra nicht auf Dritte übertragen werden.Die Gewährleistung ist beschränkt auf das Produkt und gegebenenfalls mitgeliefertesOriginalzubehör. Die Gewährleistung setzt voraus, daß das Gerät ausschließlich entsprechendder Anleitung betrieben wurde.Innerhalb der Garantie repariert oder ersetzt Biometra alle zurückgesandten defekten Teileohne Berechnung. Die Garantie gilt nicht für Schäden, die durch unsachgemäßen Gebrauch,Fahrlässigkeit oder normalen Verschleiß verursacht sind.___________________________________________________________________________Biometra biomedizinische Analytik GmbHRudolf-Wissell-Str. 30D-37079 Göttingen ServiceabteilungPostfach 1544 Rudolf-Wissell-Str. 14-16D-37005 Göttingen D-37079 GöttingenTel: ++49 – (0)5 51 / 50 68 6-0 Tel.: ++49 – (0)5 51 / 50 88 1-10Fax: ++49 – (0)5 51 / 50 68 6-66 Fax.: ++49 – (0)5 51 / 50 88 1-11e-mail: info@biometra.co.ukinternet: http://www.biometra.de14