Infoblatt Quicktype 11-2009 - attomol.de
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<strong>attomol</strong> ® <strong>Quicktype</strong> Mutationsnachweise<br />
Anwendung<br />
<strong>Quicktype</strong> für zuverlässige Mutationsnachweise:<br />
minimale personalgebun<strong>de</strong>ne Zeit,<br />
aufgrund weniger Pipettierschritte<br />
kurze Testzeit, da zusätzliche Inkubationsschritte<br />
wie Restriktionsverdauung/ Hybridisierung<br />
entfallen<br />
leichte Testinstallation im Labor, da kein<br />
spezielles Equipment erfor<strong>de</strong>rlich ist, das<br />
<strong>de</strong>n Standard eines allgemeinen molekulardiagnostischen<br />
Laboratoriums überschreitet<br />
Faktor V Lei<strong>de</strong>n Mutation<br />
(1691G>A)<br />
Faktor II Prothrombin<br />
Mutation (20210G>A)<br />
Hyperhomocysteinämie<br />
(MTHFR 677C>T,<br />
1298A>C)<br />
Plasminogen Aktivator<br />
Inhibitor -1 (PAI-1 4G/5G)<br />
Faktor XIII<br />
Polymorphismus<br />
(V34L)<br />
Hämochromatose<br />
(C282Y, H63D, S65C)<br />
HLA-B27* (Allelnachweis)<br />
Attomol GmbH<br />
Schulweg 6, OT Lipten<br />
03205 Bronkow<br />
Tel: +49 35329 5906-0<br />
Fax: +49 35329 5906-19<br />
E-Mail: info@<strong>attomol</strong>.<strong>de</strong><br />
Internet: www.<strong>attomol</strong>.<strong>de</strong><br />
Apolipoprotein E<br />
(Allele E2/E3/E4)<br />
Apolipoprotein<br />
B-100 (R3500Q)<br />
α-1-Antitrypsin<br />
(Allele PiM/PiS/PiZ)<br />
Laktoseintoleranz (-13910C>T,<br />
-22018G>A)<br />
DPD-Exon 14-Skipping-<br />
Mutation<br />
GST P1 Polymorphismus (I105V)<br />
GST M1/T1 (Allelnachweis)<br />
MDR1 Mutation (3435C>T)<br />
NAT2 (C481T, G590A, G857A)<br />
VKORC1 (<strong>11</strong>73C>T)
Technologie<br />
Nach <strong>de</strong>r Isolierung von DNS aus Blut wer<strong>de</strong>n bei<strong>de</strong> Allele eines<br />
bestimmten Gens während <strong>de</strong>r <strong>Quicktype</strong>-Geno-typisierung spezifisch<br />
amplifiziert. Die Auftrennung <strong>de</strong>r Amplifikationsprodukte<br />
wird mittels Agarosegelelektro-phorese durchgeführt.<br />
Wenn bei<strong>de</strong> Allele die Wildtypsequenz tragen (homozygoter<br />
Wildtyp) beinhaltet das Agarosegel nur eine spezifische Ban<strong>de</strong> bei<br />
140 bp (Bild 1). Wenn ein Allel die Wildtypsequenz und das<br />
an<strong>de</strong>re die Mutationssequenz (heterozygot) trägt, erscheinen zwei<br />
Ban<strong>de</strong>n bei 140 bp beziehungsweise 180 bp. Wenn die Proben-<br />
DNS homozygot mutiert ist, erscheint im Gel nur eine Ban<strong>de</strong> bei<br />
180 bp.<br />
Negativ- Positiv Probe Probe Probe<br />
kontrolle kontrolle 1 2 3<br />
HZ MU WT HZ<br />
Typisches Bild <strong>Quicktype</strong>-amplifizierter Proben, DNS separiert in 3 %<br />
Agarosegel<br />
Testdurchführung<br />
Zeitprofil<br />
Vorbereitung <strong>de</strong>r PCR 10 min<br />
Transferieren <strong>de</strong>r PCR-Produkte aufs Gel 10 min<br />
Inkubationszeiten<br />
Genotypisierung mittels<br />
<strong>Quicktype</strong>:<br />
WT = homozygoter WildTyp<br />
HZ = HeteroZygot<br />
MU = homozygote MUtation<br />
180 bp<br />
140 bp<br />
Analyse und Dokumentation <strong>de</strong>r Ergebnisse 10 min<br />
PCR-Inkubation 2 h<br />
Agarosegelelektrophorese 45 min