Validierung des MELISA -Tests zum Nachweis einer Metallu - biovis ...

528 E. Valentine-Thon and H.-W. Schiwara: Validierung des MELISA
Tabelle 2
Interassay Variation des MELISA -Tests.
Antigen Test 1 Test 2 Test 3 Test 4 Test 5
HgCl (SI) 38,0 48,6 38,8 24,4 21,3
q Kontrolle (SI) 30,8 62,0 68,5 47,0 39,8
y Kontrolle (cpm) 2392 2732 1835 2733 2190
y Kontrolle: cpm Wert ist der Mittelwert von 3 Bestimmungen.
Tabelle 3
Wiederholungsuntersuchungen (ns196).
Test 1
q
y
Test 2 q 32 0
y 12 152
Tabelle 4
Positiv (SIG3)
Diskordante Ergebnisse (ns12).
3,0 1,7
3,1 0,6
3,2 1,3
3,4 1,0
3,4 1,5
3,5 2,1
3,7 2,4
3,7 2,8
4,0 2,1
4,3 2,9
4,6 2,8
10,1 1,8
Negativ (SI-3)
Einmal wurde Blut von Patienten in Doppelbestimmung
am selben Tag von zwei verschiedenen technischen
Assistenten getestet. Typische Ergebnisse sind in Tabelle
1für Patient 1, der im Epikutan-Test positiv auf Nickel
reagierte, dargestellt. Während die quantitativen SI-Werte
zwischen den Wiederholungsmessungen gering schwanken,
stimmen die qualitativen Ergebnisse gut überein und
zeigen deutlich die positive Reaktion auf Nickel und eine
negative Reaktion auf alle anderen getesteten Metalle.
Zum anderen wurde das Blut von Patient 2 (Epikutan-
Test stark positiv auf Quecksilber) an 5 verschiedenen
Tagen in zwei- bis vierwöchentlichen Intervallen getestet
(Tabelle 2). Trotz der Variation der aktuellen SI-Werte reagiert
der Patient reproduzierbar positiv auf anorganisches
Quecksilber (SI-Mittelwert: 34,2"11,2) Die Ergebnisse
mit Ethyl-, Methyl- und Phenylquecksilber waren negativ
(SIF1,3, Ergebnisse nicht dargestellt) und sprechen für
die Spezifität der positiven Reaktion auf anorganisches
Quecksilber. Die Hintergrundproliferation (Negativkontrollwert)
blieb konstant (cpm Mittelwerts2376"381).
Ähnliche Befunde wurden bei einem Patienten erhoben,
der im Epikutan-Test postiv auf Nickel reagierte (Ergebnisse
nicht dargestellt).
Schließlich wurden 196 Testungen in Doppelbestimmung
jeweils am selben Tag von derselben oder unterschiedlichen
technischen Assistenten durchgeführt
(Tabelle 3). Die Ergebnisse zeigen eine Konkordanz-Rate
von 94%. Elf der 12 diskordanten Ergebnisse hatten ein
positives Ergebnis mit einem niedrigen SI von F4,6
(Tabelle 4). Die Reproduzierbarkeit betrug also 94% bei
einem Cut-off des SI von G3, oder 99% bei einem Cutoff
von G5.
Die Rolle der Lymphozytenkonzentration
Um den Einfluss der Lymphozytenkonzentration auf die
Ergebnisse des MELISA -Tests zu untersuchen, wurden
serielle Verdünnungen der Lymphozyten von Patient 2
(oben beschrieben) und Patient 3 (Epikutan-Test positiv
auf Nickel) gegen Quecksilber bzw. Nickel getestet
(Tabelle 5). In beiden Fällen fiel die metallspezifische
Reaktivität schnell ab und wurde bei einer Zellkonzentration
von 250 000 Zellen/ml (Quecksilber) und 62 500 Zellen/ml
(Nickel) negativ, während die nicht-spezifische
mitogene Reaktivität in beiden Fällen bis zu einer Zellkonzentration
von 7813 Zellen/ml positiv blieb. Die
Hintergrundproliferation wurde weniger durch die Zellkonzentration
beeinflusst und bewegte sich zwischen
2698 und 964 cpm (Mittelwert: 1048 cpm) für Quecksilber
und zwischen 2823 und 678 cpm (Mittelwert:
1398 cpm) für Nickel (Ergebnisse nicht dargestellt).
Die Rolle der Metallkonzentration
Um die berichtete mitogene Aktivität hoher Konzentrationen
von anorganischem Quecksilber ()0,5 mg/ml) zu
untersuchen, wurden Lymphozyten von 10 randomisierten
Patienten mit seriellen Verdünnungen von HgCl
gestestet (Abbildung 1). HgCl-Konzentrationen von
)0,5 mg/ml induzierten positive Stimulationen bei 8 von
10 Patienten (80%); nur einer dieser Patienten zeigte eine
schwache Antwort (SIs3,2) auf Konzentrationen von
F0,5 mg/ml.
Tabelle 5
Rolle der Lymphozytenkonzentration.
Zellen/ml Hg PWM Ni PWM
(SI) (SI) (SI) (SI)
1 000 000 21,3 39,8 41,1 104,8
500 000 4,4 45,6 26,0 154,3
250 000 0,5 61,5 13,0 98,5
125 000 0,6 11,5 7,3 131,3
62 500 1,0 15,0 2,9 147,2
31 250 1,2 6,3 1,4 50,5
15 625 1,3 5,7 0,8 10,4
7813 1,0 2,3 2,1 1,8
PWMsPoke Weed Mitogen (Positivkontrolle).