Validierung des MELISA -Tests zum Nachweis einer Metallu - biovis ...

526 E. Valentine-Thon and H.-W. Schiwara: Validierung des MELISA
very low positive (ns4) in MELISA . MELISA reactivity
is directly dependent on lymphocyte concentration: the
higher the lymphocyte concentration per test, the stronger
the reactivity. Concentrations of inorganic mercury
)0.5 mg/ml cause non antigen-specific (mitogenic) reactions
in a majority of patients. The reproducibility rate
was 94% using a cut-off of Stimulation Index G3 or 99%
using a cut-off of G5. While the absolute intra- and interassay
Stimulation Index values may vary, the qualitative
results are highly reproducible.
The MELISA Test is reproducible, sensitive, specific,
and reliable for detecting metal sensitivity in metal-sensitive
patients.
Keywords: lymphocyte transformation test; MELISA -
Test; mercury; metal allergy; nickel.
Einleitung
Metallallergien werden konventionell im Epikutan-Test
oder ‘‘Patch-Test’’ festgestellt, bei denen die vermutete
allergisierende Substanz auf die Haut aufgebracht und
nach 3–4 Tagen die Entwicklung von Erythemen, Papeln
oder Bläschen an den Applikationsstellen geprüft wird.
Eine positive Hautreaktion kann für eine spezifische
Metallallergie sprechen, allerdings ist der Test nicht in der
Lage, allergische von irritativen Reaktionen zu unterscheiden.
Außerdem hat er eine geringe Sensitivität und
eine schlechte Reproduzierbarkeit. Dazu scheint er nur
für Allergene geeignet zu sein, für die die Haut das Zielorgan
der Sensibilisierung ist. Ferner kann er selbst in
vivo-Sensibilisierungen induzieren und bei bereits sensibilisierten
Personen eine Exazerbation der Symptome
verursachen w1–5x. Eine Alternative ist der Lymphozyten-
Transformations-Test (LTT), bei dem Lymphozyten
(Gedächtniszellen) des betreffenden Patienten zusammen
mit dem zu untersuchenden Allergen 5–6 Tage kultiviert
werden. Die dabei erfolgende Lymphoblastentransformation
wird morphologisch nachgewiesen,
die Messung der Lymphozytenproliferation erfolgt
aufgrund des 3 H-Thymidin-Einbaus. Der ursprünglich
Mitte der sechziger Jahre für die Untersuchung der
Histoinkompatibilität der HLA-Antigene der Klasse II entwickelte
LTT w6, 7x wurde für die HLA Klasse II-Antigentypisierung
modifiziert w8x und auch vielfach zum
Nachweis von Typ IV-Allergien gegen Medikamente,
Metabolite, Krankheitserreger und Metalle verwendet
w9–17x. Der LTT wurde ein Standard-Test zum Nachweis
von Allergien gegen Nickel, Gold, Cobalt, Chrom und Palladium
w1, 18–20x. Der LTT für Beryllium ist inzwischen
der ‘‘Gold-Standard’’ für die Diagnose der Lungen-Berylliose
w21, 22x.
1994 veröffentlichten Stejskal et al. eine Modifikation
des LTT zum Nachweis von Metallsensibilisierungen, den
MELISA -Test (memory lymphocyte immunostimulation
assay) w23x. Durch eine höhere Lymphozytenzahl im Test,
die Wahl einer weder zytotoxischen noch mitogenen
Metallkonzentration, die Depletion von Monozyten aus
der Population der mononukleären Zellen und die Ergänzung
der radiometrischen Ergebnisse durch eine morphologische
Untersuchung konnten Sensitivität und
Spezifität verbessert werden. In den letzten sechs Jahren
wurden weltweit mehrere Laboratorien für die Durchführung
des MELISA -Tests lizenziert und eine Reihe von
wissenschaftlichen Arbeiten, die seine klinische Wertigkeit
zeigen, veröffentlicht w24–26x oder befinden sich in
Vorbereitung w27x.
Das ehemalige Labor Dr. Schiwara & Partner in Bremen
erhielt 1999 die Lizenz für die Durchführung des MELI-
SA -Tests. Um die Kriterien für die Akkreditierung nach
ISO 17025 zu erfüllen, wurde der Test hinsichtlich Sensitivität,
Spezifität, Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit
validiert. In der vorliegenden Studie werden die
Ergebnisse dieser Validierung des MELISA -Tests zum
Nachweis einer Metallsensibilisierung dargestellt.
Material und Methoden
Blutproben
Für alle Untersuchungen, ausgenommen die Bestimmung
der Reproduzierbarkeit, wurde das Blut von 250
konsekutiven Proben verwendet, die im Laufe des Jahres
2001 an das Labor für die routinemäßige Durchführung
des MELISA -Tests geschickt wurden. Die meisten Proben
stammten von Patienten mit klinischem Verdacht auf
eine Typ IV Metall-Allergie.
Für die Untersuchung der Reproduzierbarkeit wurde
Blut eingesetzt, das im Laufe des Jahres 2000 eingeschickt
wurde und aus dem genügend Lymphozyten für
Doppelbestimmungen gewonnen werden konnten. Sie
wurden am selben Tag von ein und derselben oder zwei
verschiedenen technischen Assistenten durchgeführt.
Alle Blutproben wurden mit CPDA-Monovetten (SAR-
STEDT AG & Co., Nümbrecht) oder in ACD Solution A
Vakutainer Röhrchen (Becton Dickinson GmbH, Heidelberg)
gewonnen, mit der normalen Post oder mit privaten
Kurieren transportiert und trafen im Labor in der Regel
innerhalb von 24 Stunden, maximal 48 Stunden nach der
Blutentnahme ein. Die Lymphozyten wurden unmittelbar
nach dem Eintreffen im Labor isoliert und entweder direkt
für den MELISA -Test verwendet oder über Nacht bei
48C in einem Medium, das 20% gepooltes hitzeinaktiviertes
humanes AB-Serum enthielt (Sigma-Aldrich Chemie
GmbH, Taufkirchen), gelagert und dann für den Test
eingesetzt.
Die einsendenden Ärzte waren hauptsächlich Allgemeinmediziner,
Allergologen und Dermatologen, Umweltmediziner
oder Homöopathen, seltener Zahnärzte oder
Psychiater. Die meisten hatten ihre Praxis in Deutschland,
ein kleiner Teil in Australien, Belgien, England, Frankreich,
Griechenland, Niederlanden, Israel, Italien, Schweden,
Schweiz und USA.