TECHNICAL REPORT Validierung des Milch ... - MINITÜB GmbH

TECHNICAL REPORT
11 | 2010
Validierung des Milch-Progesteron-Schnelltests eProCheck®
anhand der Standardanalyse der Klinik für Wiederkäuer,
LMU München
Häusler E.-M., 2008. Minitüb GmbH, Deutschland
Mit dem im Folgenden beschriebenen Versuch wurde verglichen, inwieweit die Ergebnisse der eProCheck® Messungen von Progesteron in Milchproben
mit den entsprechenden im Serum ermittelten Werte übereinstimmen. Die auf einem ELISA Testsystem basierende eProCheck® Analyse
wurde an der Klinik für Wiederkäuer der LMU München/Oberschleißheim durchgeführt und der etablierten Labormethode EIA gegenübergestellt.
Versuchsaufbau:
Der Versuch wurde auf zwei Betrieben mit Proben von insgesamt 15 Kühen durchgeführt. Durch das Einsetzen einer CIDR Spange wurde die
Synchronisation der Tiere 10 Tage vor dem erwünschten Ovulations-Tag eingeleitet.
Einsetzen der CIDR Spange: Tag -10
Applikation von Prostaglandin: Tag - 4
Entfernung der CIDR Spange: Tag - 3
Erwarteter Tag der Ovulation / Besamungszeitpunkt: Tag 0
Die Probennahme von Milch und Blutproben begann am Tag der Prostaglandingabe, 4 Tage vor der vermuteten Ovulation. An 11 weiteren,
definierten Tagen des Brunstzyklus wurden jeweils parallel Milch- und Blutproben der Kühe genommen.
Die Milchproben wurden vor Ort mit dem eProCheck® - Schnelltest analysiert und der Progesteronwert sofort ermittelt. Die Ergebnisse für diesen
Versuch wurden vom Gerät nicht als Balkendiagramm ausgegeben sondern es wurde hier auf die analogen Nanogrammwerte zurückgegriffen,
um später einen direkten Vergleich mit den Werten im Serum herstellen zu können.
Der Progesterongehalt im Serum wurde im Labor der Klinik für Wiederkäuer in Oberschleißheim mit einem kompetitiven Immunoassay mit
Doppelantikörpertechnik auf Mikrotiterplatten bestimmt. Für den Nachweis wurde ein monoklonaler progesteronspezifischer Antikörper aus
der Ratte verwendet.
Insgesamt wurde auf diese Weise ein Proben- und Datenmaterial von 12 Milch- und 12 Serumproben pro Kuh in einem Zeitraum von 26 Tagen
gesammelt und analysiert.
Im Laufe der Versuchsdauer mussten 3 Tiere aus verschiedenen Gründen aus dem Versuch ausscheiden. Die Messdaten der verbleibenden 12
Tiere wurden grafisch aufbereitet, um den Verlauf der ermittelten Progesteronwerte in Milch und Blutserum deutlich darzustellen.
Bei der tierärztlichen Trächtigkeitsuntersuchung nach Ende des Versuchs wurde bei 6 Kühe eine Trächtigkeit und bei 6 Kühe eine Nicht-Trächtigkeit
festgestellt.
www.minitube.de

Ergebnisse:
Grafik 1: Progesteronverlauf bei Kühen, die im Anschluss an den Versuch nach tierärztlicher TU als trächtig diagnostiziert wurden:
In obiger Grafik sind die Mittelwerte aller Messergebnisse der Progesteronanalyse in Milch und der Progesteronanalyse im Serum dargestellt.
An der Ordinate links ist zusätzlich zu den analogen Progesteronwerten auch die korrespondierende Balkenanzeige angetragen. Die horizontal
verlaufenden Linien bezeichnen die Schwellenwerte von 3ng/ml und 9 ng/ml.
An Tag -4 wurde Prostaglandin verabreicht. Der in Milch gemessene Progesteronwert fällt anschließend von einem hohen Niveau von über 9 ng/
ml rapide ab. Es war somit ein aktiver Gelbkörper vorhanden, der sich durch die Prostaglandingabe rückbildet. Die Balkenanzeige des eProCheck®
zeigt in diesem Fall einen Rückgang des Progesteronspiegels von 6 Balken auf 1 Balken an Tag -2 an. Ab Tag 0 (Ovulation) beginnt der Wert
wieder zu steigen und klettert innerhalb von zwei Tagen auf eine Anzeige von 2 Balken. Bis Tag 7 ist ein kontinuierlicher Anstieg des Progesteronspiegels
zu verzeichnen. Mit diesem Tag und mit Eintritt in die Zwischenbrunst wird das Level von 9 ng/ml Progesteron überschritten und der
eProCheck® gibt dies mit der maximal Anzeige von 6 Balken wieder.
An Tag 19 nach Besamung, an dem eine Frühträchtigkeitskontrolle anhand von Progesteron empfohlen wird, kann aufgrund des kontinuierlich
hohen Progesteronspiegels abgeleitet werden, dass mit 80%iger Wahrscheinlichkeit eine Trächtigkeit besteht. Durch Unregelmäßigkeiten wie
z.B. Gelbkörperzysten, persistierende Gelbkörper, oder das Absterben des Embryos zu einem späteren Zeitpunk kann hier noch keine 100%ige
Aussage über eine bestehende Trächtigkeit getroffen werden.
www.minitube.de

Grafik 2: Progesteronverlauf bei Kühen, die im Anschluss an den Versuch nach tierärztlicher TU als nicht trächtig diagnostiziert wurden.
Hier sind ebenfalls die Mittelwerte aller Messergebnisse der Progesteronanalyse in Milch und der Progesteronanalyse im Serum dargestellt. An
der Ordinate links befinden sich die korrespondierenden Balkenanzeigen. Die horizontal verlaufenden Linien bezeichnen die Schwellenwerte von
3ng/ml und 9 ng/ml.
Wie bereits in der ersten Grafik ist hier ebenfalls ein Abfall des Progesteronspiegels von hohem Niveau an Tag -4 bis hin zu 1 Balken an Tag 0 zu
verzeichnen. Nach der Ovulation und erneutem Gelbkörperwachstum steigt der Wert wiederum rapide an, bis er die 9 ng/ml Schranke durchbricht
und eine konstante Anzeige von 6 Balken während der Zwischenbrunst vorzufinden ist. An Tag 15 beginnt hier der Progesteronspiegel
bereits abzufallen und hat an Tag 19 ein Messergebnis von 3 Balken erreicht. Bei einem Frühträchtigkeitstest kann somit das Ergebnis abgeleitet
werden, dass mit 100%iger Sicherheit keine Trächtigkeit besteht, was eine Wiederbelegung 1-2 Tage später zur nächsten Ovulation ermöglicht.
Die Tiere im Versuch wurden jedoch nicht sofort wiederbelegt. Durch eine tierärztliche Untersuchung zu einem späteren Zeitpunkt wurde bei
allen Tieren mit einem abfallenden Progesteronwert an Tag 17-19 die Nichtträchtigkeit bestätigt.
Fazit:
Anhand oben angeführter Grafiken ist sehr gut ersichtlich, dass die mit dem eProCheck® aus Vollmilch ermittelten Progesteronwerte zu den im
Labor in einem Enzymimmunoassay aus dem Serum analysierten Werten eine deutliche Parallelität aufweisen.
Damit wurde gezeigt, dass die mit dem eProCheck® Schnelltest ermittelten Progesteronspiegel aussagekräftige Informationen liefern, mit denen
zuverlässig der Reproduktionsstatus der Kuh bestimmbar ist.
Die eProCheck® Ergebnisse bilden daher eine aussagekräftige Grundlage für effektive Maßnahmen im modernen Reproduktionsmanagement.
www.minitube.de