Dissertation F.Grotelüschen - Universität zu Lübeck

- Lösung B: 5,882 g Natriumcitrat (Merck, Darmstadt, Deutschland) in 200 ml Aqua
dest..
- Gebrauchslösung: 4,5 ml von Lösung A und 20,5 ml von Lösung B mit Aqua dest. auf
250 ml auffüllen.
c) Vectastain elite ABC (Avidin-Biotin-Komplex) Kit-Peroxidase, Vector laboratories
Inc., USA:
Verdünnung der Gebrauchslösungen:
- Normalserum: 15 µl Normalserum auf 1 ml Tris-Puffer.
- Biotinylierter Sekundärantikörper: 5 µl auf 1 ml Tris-Puffer.
- Avidin-Biotin-Komplex: je 20 µl der Avidin- und Biotingebrauchslösung auf 1 ml
Tris-Puffer.
d) Peroxidase Substratkit AEC (3-Amino-9-Ethyl-Carbazol), BioPrime Inc, USA:
Herstellung der Gebrauchslösung: 10 µl AEC-Lösung auf 240 µl Peroxid-
Substratpuffer.
e) Hämalaunlösung (Hämatoxylin nach Mayer) zur Gegenfärbung.
Verwendete Antikörper:
a) E-Cadherin: monoclonaler Maus E-Cadherin Antikörper (sc-8426 Santa Cruz
Biotechnology, Inc., USA) Verdünnung 1:200, entspricht einer Endkonzentration von 2
µg/ml.
b) P-Cadherin: polyclonaler Ziegen P-Cadherin Antikörper (sc-1501 Santa Cruz
Biotechnology, Inc., USA), Verdünnung 1:200, entspricht einer Endkonzentration von
2 µg/ml.
c) N-Cadherin: polyclonaler Kaninchen N-Cadherin Antikörper (sc-7939 Santa Cruz
Biotechnology, Inc., USA), Verdünnung 1:100, entspricht einer Endkonzentration von
2 µg/ml.
d) α-Katenin: polyclonaler Ziegen α-Katenin Antikörper (sc-1495 Santa Cruz
Biotechnology, Inc., USA), Verdünnung 1:200, entspricht einer Endkonzentration von
2 µg/ml.
e) β-Katenin: polyclonaler Ziegen β-Katenin Antikörper (sc-1496 Santa Cruz
Biotechnology, Inc., USA), Verdünnung 1:200, entspricht einer Endkonzentration von
2 µg/ml.
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