Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Diskussion
5.4.2 Interaktion zwischen löslichem IgG/IgE und immobilisiertem IPSE.
Analoge Ergebnisse fanden sich auch im umgekehrten Falle, d.h. wenn IPSE immobilisiert
wurde und IgG in Lösung vorlag. Es wurden hier zwei Methoden angewendet. Bei der ersten
Methode wurde HEK-IPSE über NHS-Gruppen kovalent an Sepharose gebunden. Dabei war
eine eventuelle Maskierung der IgG-Bindungsstellen auf dem IPSE-Molekül nicht
auszuschließen. Bei der zweiten Methode wurde rekombinantes IPSE über den vorhandenen
His-Tag an Ni-NTA-Agarose gebunden. Durch die Bindung über den His-Tag, sollte
vermieden werden, dass Bindungsstellen für das Immunglobulin verdeckt vorliegen. Doch
auch hierbei zeigte sich keine erhöhte Bindungsaffinität, gleichgültig ob IPSE zuerst an Ni-
NTA-Agarose gebunden wurde und dann IgG oder IgE äquimolar in gelöster Form zugegeben
wurden oder ob IPSE und IgG vor der Bindung an Ni-NTA in einem 2:1-Verhältnis in
Lösung vorinkubiert wurden. Ergänzend wurden die Versuche sowohl mit HEK-IPSE (Cterminaler
His-Tag) als auch mit E. coli-IPSE (N-terminaler His-Tag) durchgeführt, um eine
sterische Behinderung der Immunglobulinbindung für den Fall auszuschließen, dass sich die
Bindungsstellen im Bereich des N-oder C-terminus von IPSE befinden. Aber auch dies
resultierte nicht in höherer Bindungsaffinität.
Zusammengefasst zeigen auch diese Bindungsversuche von IPSE an Immunglobulin mittels
affinitätschromatischer Methoden eine schwache Bindung zwischen beiden Molekülen,
unabhängig davon welcher der beiden Bindungspartner immobilisiert und welcher in Lösung
war.
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