Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Diskussion
zeigte. Protein L besteht aus fünf homologen Ig-bindende Domänen (B1-B5), die mit hoher
Affinität an die
et al., 1992) und diese quervernetzen. Die maximale Bindung wurde bei pH 7 – 10 gemessen
(Akerstrom and Bjorck, 1989), so dass der von uns eingesetzte Puffer mit pH 7,4 im
optimalen Bereich lag, was durch die Präzipitatbildung sichtbar gemacht wurde. Das fehlende
Auftreten von Komplexen in der Gelchromatographie und die fehlende Bildung von
sichtbaren Präzipitaten weisen auf eine schwache Bindungsaffinität zwischen IgG und HEK-
IPSE hin.
5.3.3.2 Bindungsuntersuchung von IgE und HEK-IPSE im 1:1-, 1:4- und 2:1-
Verhältnis
Die Untersuchung der Komplexbildung von HEK-IPSE mit IgE ergab ein anderes Ergebnis
als mit IgG. Hier ist deutlich eine Interaktion zwischen den beiden Molekülen eingetreten. In
Anwesenheit von IPSE war im Chromatogramm eine Linksverschiebung des monomeren
IgE-Peaks zu beobachten. Diese war im IgE-Überschuss (2:1) sehr gering und nahm mit
zunehmender HEK-IPSE-Konzentration (1:1 und 1:4) weiter zu, was darauf hindeutet, dass
mehr als ein Molekül IPSE an ein Molekül IgE binden kann. Des Weiteren zeigte das
Chromatogramm sowohl beim 2:1- als auch beim 1:1-Verhältnis ein deutliches Abnehmen
des HEK-IPSE-Peaks, während beim Verhältnis 1 Teil IPSE + 4 Teile IgE noch
ungebundenes HEK-IPSE als Peak sichtbar war. Bei diesem Verhältnis herrscht also
offensichtlich ein IPSE-Überschuss, woraus folgt, dass keine vier Moleküle IPSE pro IgE
binden können. Auch die Untersuchung der einzelnen Fraktionen in der SDS-PAGE zeigte,
dass HEK-IPSE mit IgE interagiert hat. Die Fraktionen des IgE-Peaks wiesen neben IgE auch
HEK-IPSE auf. Weiterhin wurde in der SDS-PAGE sichtbar, dass in jedem eingesetzten
Verhältnis, also auch bei 2:1 und 1:1, noch ungebundenes HEK-IPSE vorliegt, was auch hier
auf eine relativ schwache Bindung zwischen IPSE und IgE hinweist.
Das Proteinprofil der Komplexe aus IgE und Protein L, als Kontrolle, gibt Aufschluss über
eine mögliche Linksverschiebung nach der Ausbildung eines großen Komplexes, der durch
eine Quervernetzung entsteht. Die leichte Linksverschiebung des IgE-Peaks nach
Komplexierung mit IPSE ist jedoch zu gering, um mit einer Quervernetzung von IgE
kompatibel zu sein. Außerdem gab es ebenfalls hier, wie schon bei IgG beschrieben, keine
Ausbildung von sichtbaren Präzipitaten, wie sie mit Protein L und IgG zu sehen waren (s.
5.3.3.1; s. auch als Beispiel Abbildung 5.1).
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