Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

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Ergebnisse beide Proben eine sehr ähnliche Aktivität auf den Basophilen, womit kein sicherer Unterschied in der Aktivität zwischen zentrifugiertem und nicht-zentrifugiertem IPSE zu erkennen ist. IL-4 (pg/10 6 Basophile) 600 500 400 300 200 100 0 nicht zentrifugiert zentrifugiert 0 0,8 4 20 100 500 2500 HEK-IPSE [ng/ml] + IL-3 Abbildung 4.22: IL-4-Freisetzung aus gereinigten humanen Basophilen durch HEK-IPSE. Basophile wurden mit HEK-IPSE stimuliert und die IL-4-Freisetzung im ELISA gemessen. HEK-IPSE wurde nichtzentrifugiert und zentrifugiert mit jeweils den gleichen Konzentrationen eingesetzt. Positivkontrolle: anti-IgE (174 IL-4 (pg /10 6 Basophile)) 78
Diskussion 5 Diskussion Infektionen mit parasitären Würmern führen zuverlässig zu einer Th2-Antwort mit gesteigerter IgE-Synthese und sind daher als Modell für die Aufklärung des Th2-auslösenden Mechanismus bei einer Allergie gut geeignet. Aus den Eiern des Trematoden Schistosoma mansoni wurde ein Triggerfaktor (IPSE) isoliert, der die IL-4-Freisetzung aus humanen Basophilen von nicht-infizierten Spendern bewirkt und daher ein potenzieller Immunmodulator in Richtung Th2-Antwort ist. Frühere Untersuchungen zeigten, dass IPSE ein Immunglobulin-bindender Faktor ist (Blindow, 2004), der Basophile IgE-vermittelt aktiviert (Haisch et al., 2001). Die IgE-vermittelte Aktivierung von Basophilen erfolgt anerkanntermaßen durch Quervernetzung von FcεRI-rezeptorgebundenem IgE (Metzger, 1992). Eine Quervernetzung kann dabei entweder antigenspezifisch durch Allergene, oder antigenunspezifisch durch Lektine (Haas et al., 1999) oder B-Zellsuperantigene (Patella et al., 1999; Florio et al., 2000; Genovese et al., 2003) erfolgen (s. auch 1.5). Für IPSE ist ein antigenspezifischer Wirkungsmechanismus sehr unwahrscheinlich, da IPSE, wie bereits erwähnt, auch Basophile nicht-infizierter Spender aktiviert und zudem auch an humanes monoklonales IgE eines gesunden Spenders (Firma Diatec) bindet. Ein Lektin-artiger Wirkungsmechanismus wurde von Blindow (2004) ausgeschlossen, da IPSE auch an deglykosylierte Immunglobuline bindet. Somit lag die Vermutung nahe, dass es sich bei IPSE um ein B-Zellsuperantigen handelt. Diese sind von anderen pathogenen Organismen bekannt, z.B. Protein L aus Peptostreptococcus magnus, Protein A aus Staphylococcus aureus oder das Hüllprotein gp120 des Human Immunodeficiency Virus. Erstaunlicherweise ergaben jedoch alle bisher durchgeführten Experimente, wie Sandwich-Blots, Doppelimmunodiffusions- Experimente und Biacore-Analysen (Schramm, unveröffentlicht; Blindow, 2004; Wodrich 2006), dass IPSE im Gegensatz zu den anderen oben genannten B-Zellsuperantigenen nicht in der Lage ist, Immunglobuline querzuvernetzen. Daher stellte sich die Frage: Erfolgt die Basophilenaktivierung durch IPSE über einen neuen Wirkungsmechanismus ohne IgE- Quervernetzung allein über eine Konformationsänderung ausgelöst durch die Bindung an IgE? Ein solcher Wirkungsmechanismus ist durchaus denkbar, da in einer Reihe von Publikationen bei der Bindung von IgE an FcεRI Konformationsänderungen der Interaktionspartner beschrieben worden sind (Sutton and Gould, 1993; Wan et al., 2002; Garman et al., 2001). Charles et al. (2004) beschrieben kürzlich ein Fc-assoziiertes 28 kDa Protein (p28), welches nach Bindung von IgE an den Rezeptor dissoziiert und nach Dissoziation von IgE 79
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Aus dem Forschungszentrum Borstel L
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Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichn
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Zusammenfassung Zusammenfassung Die
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Einleitung 1 Einleitung Der Begriff
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Einleitung differenzieren zu antik
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Einleitung Abbildung 1.1: Schematis
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Einleitung 1.4 Humane basophile Gra
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Einleitung bei denen es sich um Bas
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Einleitung Es sind zwei Verlaufsfor
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Einleitung et al., 2005) handelt es
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Materialien Produkt Hank’s balanc
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Seite 45 und 46: Methoden stufenweise Erhöhung der
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Seite 85 und 86: Diskussion 5.3.1 Sandwich-Blot-Vers
Seite 87 und 88: Diskussion zeigte. Protein L besteh
Seite 89 und 90: Diskussion 5.4 Bindungsstudien von
Seite 91 und 92: Diskussion 5.5 Rekombinante IPSE-Mo
Seite 93 und 94: Diskussion 5.6 IPSE - ein unkonvent
Seite 95 und 96: Diskussion IgE-Quervernetzung der F
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Seite 109 und 110: Eigene Vorträge 7 Eigene Vorträge
Seite 111 und 112: Danksagung Karo und Ulrike, Euch da
Seite 113: 10 Eidesstattliche Erklärung Hierm
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