Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

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Abkürzungsverzeichnis NTA N-Nitrilo-tri-essigsäure PAGE Polyacrylamidgelektrophorese PBS Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (englisch “phosphate-buffered saline) rpm Umdrehung pro Minute (englisch “rounds per minute”) S. mansoni Schistosoma mansoni SAVAP Alkalisch Phosphatase-markiertes Streptavidin SDS Natriumdodecylsulfat (englisch “sodium dodecyl sulphate”) SmEA Schistosoma mansoni-Ei-Antigen TBS Tris-gepufferte Kochsalzlösung (englisch “Tris-buffered saline”) TBST TBS mit Tween 20 TEMED N,N,N´,N´-Tetramethylendiamin Th 1 T-Helferzelle Typ 1 Th 2 T-Helferzelle Typ 2 Th T-Helferzelle Tris Tris-(hydroxymethyl-)aminomethan Tween 20 Polyoxyethylensorbitanmonolaurat v/v englisch “volume per volume” w/v englisch „weight per volume“ 6
Zusammenfassung Zusammenfassung Die Anzahl der Allergieerkrankungen vom Typ-I steigt in westlichen Industrieländern immer weiter an. Typ-I-Allergien sind gekennzeichnet durch eine Th2-Immunantwort mit gesteigerter IgE-Synthese, wobei der Mechanismus ihrer Entstehung noch nicht vollständig geklärt ist. Das Schlüsselzytokin für die Weichenstellung naiver Th-Zellen zu Th2-Zellen ist das so genannte „frühe IL-4“. Als zelluläre Quelle für das frühe IL-4 werden Basophile angenommen. Im Gegensatz zu Allergien führen Infektionen mit parasitären Würmern, z. B. mit dem Trematoden Schistosoma mansoni, bei allen Betroffenen zuverlässig zu einer Th2- Immunantwort. Schistosoma mansoni ist daher ein geeignetes Modell für die Suche nach Th2- auslösenden Triggerfaktoren. Aus den Eiern von Schistosoma mansoni konnte ein Faktor isoliert werden, der Basophile zur Freisetzung von IL-4, IL-13 sowie Histamin aktiviert. Dieser Faktor wurde IPSE für „IL-4 inducing principle from Schistosoma mansoni eggs“ genannt. Es stellte sich heraus, dass IPSE mit dem schon früher beschriebenen Antigen alpha- 1 identisch ist, und es wird daher als IPSE/alpha-1 bezeichnet. IPSE/alpha-1 ist ein Immunglobulin-bindender Faktor, der neben humanen auch Immunglobuline anderer Spezies bindet. Es bindet dabei wie ein B-Zellsuperantigen an Fab-, F(ab) 2 - und Fc-Fragmente von IgG und IgE. Frühere Biacore-Daten sowie Ergebnisse aus Sandwich-Blot- und Doppelimmunodiffusions-Experimenten weisen aber daraufhin, dass IPSE/alpha-1 im Gegensatz zu B-Zellsuperantigenen Immunglobuline nicht quervernetzt und daher Basophile nicht über IgE-Quervernetzung, sondern vermutlich über einen neuen Wirkungsmechanismus aktiviert. In der vorliegenden Arbeit sollte daher der Wirkungsmechanismus von IPSE/alpha-1 weiter charakterisiert werden, insbesondere hinsichtlich der Bindungsstöchiometrie von IPSE/alpha- 1 und Immunglobulin. Für die Untersuchungen wurden rekombinante IPSE/alpha-1-Moleküle eingesetzt. IPSE/alpha-1, bindet im Dot Blot mit unterschiedlicher Intensität an IgG und dessen Fragmente IgG-Fab und Fc. Die stärkste Bindung zeigte sich dabei an das komplette IgG- Molekül, was ein Hinweis darauf ist, dass für eine „optimale“ Bindung das Gesamtmolekül benötigt wird und IPSE/alpha-1 dabei sowohl an die Fab- als auch an die Fc-Region bindet. Die Untersuchung, ob zwei Moleküle IgG-Fab an ein Molekül IPSE/alpha-1 binden, in Bezug auf die Frage der Quervernetzung von Immunglobulin durch IPSE/alpha-1, ergab ein negatives Ergebnis und bestätigte frühere Experimente, dass IPSE/alpha-1 Immunglobuline nicht quervernetzen kann. 7
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Seite 51 und 52: Ergebnisse 4.2.2 Quervernetzung von
Seite 53 und 54: Ergebnisse Abbildung 4.4: IgG-Fab w
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Seite 57 und 58: Ergebnisse auffällig, das sich die
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Ergebnisse In der Untersuchung der
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Ergebnisse 4.5.2 Untersuchung der K
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Ergebnisse Abbildung 4.10 zeigt die
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Ergebnisse Wie schon vorher bei IgG
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Ergebnisse A) B) C) D) E) F) Abbild
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Ergebnisse 4.6 Bindungsuntersuchung
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Ergebnisse IPSE dagegen C-terminal.
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Ergebnisse A) B) Abbildung 4.16: Un
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Ergebnisse wurde dann zusammen mit
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Ergebnisse eingesetzten Menge von H
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Ergebnisse auch Peaks im Bereich vo
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Diskussion 5 Diskussion Infektionen
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Diskussion 5.1 E. coli-IPSE bindet
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Diskussion 5.3.1 Sandwich-Blot-Vers
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Diskussion zeigte. Protein L besteh
Seite 89 und 90:
Diskussion 5.4 Bindungsstudien von
Seite 91 und 92:
Diskussion 5.5 Rekombinante IPSE-Mo
Seite 93 und 94:
Diskussion 5.6 IPSE - ein unkonvent
Seite 95 und 96:
Diskussion IgE-Quervernetzung der F
Seite 97 und 98:
Literatur Brunner T, Heusser CH and
Seite 99 und 100:
Literatur Florio G, Petraroli A, Pa
Seite 101 und 102:
Literatur Kagey-Sobotka A, Dembo M,
Seite 103 und 104:
Literatur Min B, Prout M, Hu-Li J,
Seite 105 und 106:
Literatur Romagnani S (1991). Human
Seite 107 und 108:
Literatur Williams ME, Montenegro S
Seite 109 und 110:
Eigene Vorträge 7 Eigene Vorträge
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Danksagung Karo und Ulrike, Euch da
Seite 113:
10 Eidesstattliche Erklärung Hierm
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