Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
auch Peaks im Bereich von etwa 1 nm, oder etwas darüber, was auf nicht-aggregiertes HEK-
IPSE-Dimer hinweisen könnte. Im Allgemeinen zeigt dieses Ergebnis, dass die HEK-IPSE
Probe sehr uneinheitlich ist und Aggregate unterschiedlicher Größe enthält.
Die zentrifugierte HEK-IPSE Probe zeigt ein etwas einheitlicheres Bild. Aggregate im
Bereich von 100 nm wurden in dieser Probe nicht mehr gemessen. Der Hauptpeak liegt hier
bei etwa 5 – 10 nm mit einer breiten Verteilung, was immer noch auf eine Aggregation von
HEK-IPSE hinweist. Die Höhe der Peaks hat in dieser Probe allerdings um ca. 1/3
abgenommen. Dies lässt sich mit hoher Wahrscheinlichkeit durch eine Abnahme der
Proteinkonzentration nach Entfernung der Aggregate durch die Zentrifugation erklären.
Hiermit ist ebenfalls das Wegfallen der Peaks bei 100nm zu erklären. Moleküle mit kleineren
Radien von etwa 1 nm sind in dieser Probe nicht zu erkennen. Im Allgemeinen wirkt diese
Probe einheitlicher als die nicht-zentrifugierte Probe, da sich hier nicht die Ausbildung von
mehreren Aggregationsstadien zeigt. Trotzdem ist immer noch die Eigenaggregation von
HEK-IPSE zu erkennen.
4.7.1 Untersuchung der IL-4-Freisetzung aus humanen Basophilen durch
zentrifugiertes bzw. nicht-zentrifugiertes HEK-IPSE
Die Untersuchung von nicht-zentrifugiertem HEK-IPSE mittels Dynamischer Lichstreuung
zeigte, dass HEK-IPSE in Lösung nicht nur als Dimer, sondern hauptsächlich in Form von
Aggregaten unterschiedlicher Größe vorliegt. Durch Zentrifugation wurden die großen
Aggregate entfernt und die Probe wurde einheitlicher. Trotzdem zeigte sich immer noch eine
Eigenaggregation (s. 4.7). Um eventuelle Unterschiede zwischen zentrifugiertem und nichtzentrifugiertem
HEK-IPSE hinsichtlich der Fähigkeit zur Basophilenaktivierung zu ermitteln,
sollten diese Proben in einem Basophilenstimulationstest mit anschließendem IL-4-ELISA (s.
3.12 und 3.13) untersucht werden. Abbildung 4.22 zeigt den Verlauf der IL-4-Freisetzung von
HEK-IPSE, sowohl nicht-zentrifugiert als auch zentrifugiert eingesetzt. Beide Proben zeigen
den charakteristischen glockenförmigen Verlauf, den alle IPSE-Präparationen aufweisen
(Wodrich, 2006). Das Maximum der IL-4-Freisetzung ist bei der zentrifugierten Probe schon
bei 0,8 ng IPSE/ml erreicht, während bei der nicht-zentrifugierten Probe das Maximum bei 4
ng IPSE/ml liegt und somit eine leicht geringere Aktivität aufweist. Da die Kurven aber
ansonsten sehr parallel laufen, kann es sich bei der zentrifugierten Probe auch um einen so
genannten Ausreißer halten, der experimentell bedingt sein könnte. Im Allgemeinen zeigen
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