Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
4.7 Untersuchung der Eigenaggregation von HEK-IPSE mittels
Dynamischer Lichtstreuung (DLS)
Wie schon durch die chemische Quervernetzung gezeigt (s. 4.4.2) besitzt HEK-IPSE eine
Eigenaggregation und liegt in Lösung mit hoher Wahrscheinlichkeit nicht als reines Dimer
vor. Wird HEK-IPSE allerdings chromatographisch oder elektrophoretisch aufgetrennt, kann
eine Komplexbildung nicht sichtbar gemacht werden (s. auch 4.5), da die mutmaßlichen
Aggregate wohl in Folge mechanischer oder elektrischer Scherkräfte zerlegt werden dürften.
Um den Einfluss von Scherkräften auszuschalten, wurde HEK-IPSE mittels DLS auf das
Vorliegen von Aggregaten untersucht. Hierbei wurde die HEK-IPSE Probe sowohl nichtzentrifugiert
als auch zentrifugiert eingesetzt und jeweils der hydrodynamische Radius
bestimmt (s. 3.10). Es wurden je Probe 10 Messungen á 10 sek durchgeführt. Abbildung 4.21
zeigt die aus der gemittelten Korrelationsfunktion (hier nicht dargestellt) errechnete
Verteilung der hydrodynamischen Radien von HEK-IPSE.
nicht-zentrifugiert
zentrifugiert
Abbildung 4.21: Verteilung der hydrodynamischen Radien von HEK-IPSE in der DLS. HEK-IPSE in PBS-
Puffer wurde nicht-zentrifugiert und zentrifugiert untersucht. Es wurden jeweils 10 Messungen á 10 sek
durchgeführt.
Die nicht-zentrifugierte HEK-IPSE Probe zeigt hierbei deutlich die Ausbildung von
Aggregaten. Es sind Peaks im Bereich von etwa 10 – 100 nm zu erkennen, wobei die
Hauptpeaks mit breiter Streuung im Bereich von 100 nm liegen. Weiterhin zeigen sich aber
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