Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
eingesetzten Menge von HEK-IPSE (VS). In den Eluatfraktionen sind nur in der ersten
Fraktion A14 die Banden von HEK-IPSE zu erkennen. Im Gegensatz zu den Banden des
Effluents sind hier die Banden sehr schwach, was auf wenig HEK-IPSE in der Eluatfraktion
hindeutet. Das heißt, es hat nur wenig HEK-IPSE an das IgG an der Säule gebunden.
Zusätzlich zu den schwachen Banden von HEK-IPSE sind in den Eluatfraktionen auch
deutlich die Banden von IgG zu erkennen.
A) B)
Effluent
Eluat
Abbildung 4.20: Untersuchung der Bindung von HEK-IPSE an IgG mittels einer Protein-G-Säule. IgG
wurde an eine Protein-G-Säule gebunden und HEK-IPSE nachträglich auf die Säule gegeben. Beide Moleküle
wurden mit einem niedrigen pH-Wert eluiert. A) Proteinprofil des Effluents von HEK-IPSE und Elution von IgG
und HEK-IPSE. B) Silbergefärbtes SDS-Gel zur Untersuchung der einzelnen Fraktionen von Durchlauf und
Elution: VS: Vor Säule (eingesetztes HEK-IPSE); A,B: Fraktionen.
Zusammenfassend kann gesagt werden, dass nur wenig IgG oder IgE an IPSE bindet, wenn
dieses vorher an eine feste Phase gebunden ist. Es macht hierbei keinen Unterschied, ob IPSE
kovalent an eine NHS-aktivierte Säule oder mittels seines His-Tags reversibel an eine Ni-
NTA-Agarose gebunden ist. Auch wenn umgekehrt IgG an eine Protein-G-Säule gebunden ist
und dann HEK-IPSE zugegeben wird, resultiert nur eine schwache Bindung zwischen diesen
beiden Molekülen.
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