Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
Des Weiteren wurde noch zusätzlich ein Kontrolllauf mit HEK-IPSE ohne vorherige Bindung
von IgG durchgeführt, um unspezifische Bindungen an die Säule auszuschließen. Abbildung
4.19 zeigt das Proteinprofil des Effluents und der Elution von HEK-IPSE (Bild A) und das
Silbergel zur Untersuchung der einzelnen Fraktionen (Bild B). Das Effluent zeigt deutlich
einen Peak bei ungefähr 90 mAUs, während bei der Elution kein Peak zu erkennen ist. Das
deutet darauf hin, dass kein HEK-IPSE unspezifisch gebunden hat, was wieder eluiert werden
könnte. Auch das Silbergel zeigt, dass HEK-IPSE nur in den Fraktionen des Effluents
enthalten ist bei ca. 45 kDa. Die Intensität der Bande spiegelt auch ungefähr die Menge des
eingesetzten HEK-IPSE wieder (VS). Die Eluatfraktionen enthalten kein HEK-IPSE. Somit
konnte eine unspezifische Bindung von HEK-IPSE an die Säule ausgeschlossen werden.
A) B)
Effluent
Eluat
Abbildung 4.19: Protein-G-Säule; Kontrolllauf mit HEK-IPSE ohne IgG. HEK-IPSE wurde über die
Protein-G-Säule gegeben (ohne vorausgegangene IgG-Bindung an Protein G) mit nachfolgender Elution durch
einen niedrigen pH-Wert. A) Proteinprofil des Effluent und der Elution. B) Silbergefärbtes SDS-Gel zur
Untersuchung der einzelnen Fraktionen von Durchlauf und Elution: VS: Vor Säule (eingesetztes HEK-IPSE);
A,B: Fraktionen; LM: Low Marker.
Abbildung 4.20 zeigt das Proteinprofil von HEK-IPSE während der Bindung an IgG
(Effluent) und die Elution beider Moleküle (Bild A). Es ist ein hoher Peak um ca. 200 mAUs
im Effluent zu erkennen, was auf viel ungebundenes HEK-IPSE schließen lässt. Der
Elutionspeak liegt bei ca. 350 mAUs, wobei hier neben HEK-IPSE auch das wieder gelöste
IgG mit einbezogen ist. In dem Silbergel, zur Untersuchung der einzelnen Fraktionen, sind
ebenfalls deutlich starke Banden von HEK-IPSE bei ca. 45 kDa in den Fraktionen des
Effluents zu erkennen, insbesondere in Fraktion A2. Die Stärke der Banden korreliert mit der
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