Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
wurde dann zusammen mit dem IgG durch einen Puffer mit niedrigem pH-Wert wieder eluiert
(s. 3.9.2.3). Abbildung 4.18 zeigt die Proteinprofile (Bild A, B) eines Kontrolllaufes mit IgG
zur Überprüfung, ob IgG vollständig an das Protein G bindet und ob es auch wieder eluiert
werden kann. Es wurde hierfür die gleiche Menge IgG (1 mg) eingesetzt, wie in den
Versuchen mit IPSE verwendet wurde. Bild A zeigt das Effluent während der Bindung von
IgG. Es ist hier nur noch ein kleiner Peak bei ca. 12 mAUs sichtbar im Gegensatz zu dem
Elutionspeak der bei ca. 275 mAUs liegt (Bild B). Bild C in Abb. 4.12 zeigt das Silbergel zur
Untersuchung der einzelnen Fraktionen. Es ist hier deutlich zu erkennen, dass das Effluent
kein nachweisbares IgG (VS) enthält (s. Fraktion A4). Dagegen sind in den Eluatfraktionen
deutliche IgG-Banden zu erkennen. D. h. IgG wurde gebunden und konnte auch wieder eluiert
werden.
A) B)
Effluent
Eluat
C)
Abbildung 4.18: Protein-G-Säule; Kontrollauf mit IgG. IgG wurde an die Protein-G-Säule gebunden und mit
einem niedrigen pH-Wert wieder eluiert. A) Proteinprofil von nichtgebundenem IgG (Effluent). B) Proteinprofil
von eluiertem IgG. C). Silbergefärbtes SDS-Gel zur Untersuchung des Durchlaufes und Elution von IgG: VS:
Vor Säule (eingesetztes IgG); A: Fraktionen; HM: High Marker.
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