Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
A) B)
Abbildung 4.17: Untersuchung der Bindung von IgG an E. coli-IPSE und HEK-IPSE (1:1) mittels IMAC
(SDS-PAGE, Silberfärbung). E.coli-IPSE oder HEK-IPSE wurden an Ni-NTA-Agarose gebunden und IgG im
gleichen Verhältnis zugegeben. Das Gemisch wurde in eine Säule gegeben. Die Elution erfolgte mit 250 mM
Imidazol A) E. coli-IPSE / IgG im 1:1-Verhältnis. B) HEK-IPSE / IgG im1:1-Verhältnis. W: Waschfraktionen;
E: Eluatfraktionen
Bild A zeigt die Bindung von IgG an E.coli-IPSE und Bild B die IgG-Bindung an HEK-IPSE.
Es ist kein Unterschied zwischen beiden Molekülen hinsichtlich der Bindung von IgG zu
erkennen. Es ist jeweils viel IgG im Effluent enthalten und wenig in den Eluatfraktionen. Die
Banden sind wesentlich schwächer als in den anderen oben gezeigten Gelen. Das liegt an der
eingesetzten Menge von IPSE. Aufgrund der geringen Konzentration von E.coli-IPSE (0,13
mg/ml) wurde weniger IPSE und somit weniger IgG in diesem Versuch eingesetzt.
4.6.3 Untersuchung der Bindung von HEK-IPSE an IgG mittels einer Protein G-
Säule
Nachdem in den vorherigen Versuchen die Bindung von löslichem Immunglobulin (IgG, IgE)
an Festphasen-gekoppeltes IPSE untersucht worden war (s. 4.6.1 und 4.6.2), sollte nun die
Bindung von löslichem IPSE an Festphasen-gekoppeltes Immunglobulin untersucht werden.
Es wurde hierfür wieder mit IgG gearbeitet. IgG wurde reversibel an eine Protein G-Säule
gebunden und HEK-IPSE im gleichen Verhältnis zugegeben. Das gebundene HEK-IPSE
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