Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
In beiden Gelen ist kein Unterschied in der IgG-Bindung zu erkennen. Das Effluent und die
erste Waschfraktion (W1) zeigen deutlich eine stark angefärbte IgG-Bande bei ca 150 kDa,
während die Eluatfraktionen nur wenig IgG aufweisen. Die Banden sind wesentlich
schwächer als im Effluent und auch im Vergleich zu den Banden von HEK-IPSE (hier bei ca.
45 kDa), was mit dem IgG zusammen von der Säule eluiert wurde. Bild C zeigt den
Kontrollversuch mit IgG, ohne das HEK-IPSE vorher an die Matrix gebunden wurde. In den
Eluatfraktionen ist eindeutig kein IgG nachweisbar. Somit ist die sichtbare Bindung in den
Eluatfraktionen mit HEK-IPSE keine unspezifische Bindung an die Ni-NTA-Agarose,
sondern eine Bindung an das HEK-IPSE direkt.
Es ist bekannt, dass die IL-4-Freisetzung aus den Basophilen durch IPSE IgE-abhängig ist
(Haisch et al., 2001; Schramm et al., 2003). Zusätzlich konnten frühere Dot-Blotting-
Versuche (Blindow 2004) als auch die Ergebnisse der Größenausschlusschromatographie
zeigen, dass IPSE an IgE mit höherer Affinität bindet als an IgG. Die oben abgebildeten
Ergebnisse (s. Abbildung 4.15) zeigen, dass nur sehr wenig IgG an das HEK-IPSE bindet.
Aus diesem Grund wurde hier auch die Bindungseigenschaft von IgE an HEK-IPSE im 1:1-
Verhältnis im Vergleich zu IgG mittels IMAC untersucht. Abbildung 4.16 zeigt die Silbergele
aus beiden Versuchen. Bild A zeigt die Bindung von IgE an HEK-IPSE und Bild B die
Bindung von IgG an HEK-IPSE. Es ist deutlich in Bild A zu erkennen das hier ebenfalls viel
IgE im Effluent und in der ersten Waschfraktion (W) enthalten ist. Es ist jeweils eine sehr
dicke Bande, die bei ca. 180 kDa liegen sollte, zu erkennen. Nur wenig IgE ist dagegen in den
Eluatfraktionen enthalten. D. h. es bindet ebenfalls nur wenig IgE an HEK-IPSE. Ein
Vergleich zeigt, dass die IgE-Banden gegenüber den IgG-Banden in den Eluatfraktionen
stärker hervortreten. Vergleicht man aber auch die Bandenstärke von HEK-IPSE in beiden
Gelen, scheinen die Banden von HEK-IPSE in Bild A ebenfalls stärker angefärbt zu sein.
Somit liegt diese stärkere Bandenfärbung vermutlich an der Silberfärbung selbst.
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