Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...
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Ergebnisse<br />
A) B)<br />
Effluent<br />
Eluat<br />
C)<br />
Abbildung 4.14: <strong>Untersuchung</strong> <strong>der</strong> Bindung von IgG an HEK-IPSE mittels einer HEK-IPSE-Säule. HEK-<br />
IPSE wurde an eine Sepharose-Säule gekoppelt. IgG wurde im gleichen Verhältnis zugegeben. Das gebundene<br />
IgG wurde mit niedrigem pH-Wert wie<strong>der</strong> eluiert. A) Proteinprofil von nicht gebundenem IgG (Effluent). B)<br />
Proteinprofil von eluiertem IgG. C) Silbergefärbtes SDS-Gel zur <strong>Untersuchung</strong> des Effluents und Eluat von IgG.<br />
A: Fraktionen; HM: High Marker<br />
4.6.2 <strong>Untersuchung</strong> <strong>der</strong> Bindung von IgG / IgE an IPSE mittels IMAC<br />
Nachdem die Ergebnisse <strong>der</strong> HEK-IPSE Säule gezeigt haben, dass nur sehr wenig IgG an<br />
IPSE gebunden hat, wurde dieser Versuch mittels IMAC wie<strong>der</strong>holt. Für diesen Versuch<br />
wurde <strong>der</strong> His-Tag von den rekombinanten IPSE-Molekülen zur reversiblen Bindung an eine<br />
Ni-NTA-Agarose ausgenutzt. Hierbei sollte erreicht werden, dass mögliche Immunglobulin-<br />
Bindungsstellen frei liegen E. coli-IPSE hat seinen His-Tag am N-terminalen Ende, HEK-<br />
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