Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
Abbildung 4.13 B zeigt die Einzelmoleküle von IgE (blaue Kurve) und HEK-IPSE (grüne
Kurve) im 1:1-Verhältnis. Bild C zeigt die Auftrennung des 1:1-Gemisches (rote Kurve) im
Vergleich zu den Einzelmolekülen. Es fällt auf, dass im Gegensatz zum vorherigen Versuch,
der IgE-Hauptpeak nicht kleiner wird. Stattdessen steigt er sogar an, was aber auf
Schwankungen beim Pipettieren zurückzuführen sein könnte, da hier mit kleinen Mengen
gearbeitet wurde. Ansonsten ist auch wieder eine leichte Linksverschiebung zu erkennen und
im Bereich des leicht aggregierten IgE’s kommt es zu einem Anstieg des Peaks. Der Peak von
HEK-IPSE nimmt wieder stark ab. Dies lässt, wie schon aus den vorherigen Versuchen
bestätigt, auf eine Interaktion zwischen beiden Molekülen schließen. Bild D (Abbildung 4.13)
zeigt noch einmal die Einzelmoleküle von IgE und HEK-IPSE, wobei HEK-IPSE hier in
vierfacher Menge eingesetzt wurde. Bild E zeigt die Auftrennung des 1:4-Gemisches im
Vergleich zu den Einzelmolekülen. Es ist auch hier wieder eine leichte Linksverschiebung des
IgE-Hauptpeaks zu sehen, der ebenfalls von der Höhe nicht abnimmt. Weiterhin ist ein
leichter Abfall des Peaks von HEK-IPSE zu erkennen, es scheint aber auch hier, dass noch
viele ungebundene Moleküle vorhanden sind. Bild F in Abbildung 4.13 zeigt vergleichend die
Auftrennung des 1:1-Gemisches (rote Kurve) und des 1:4-Gemisches. Beide Kurven
unterscheiden sich nicht stark voneinander. Beim 1:4-Gemisch ist der Übergang des
Hauptpeaks in die linke Schulter stärker verstrichen als beim 1:1-Gemisch. Der Übergang
vom Aggregat- zum Hauptpeak ist hier nicht mehr so deutlich. Ferner ist auch hier noch
deutlich ungebundenes HEK-IPSE zu erkennen.
Zusammenfassend sprachen die Ergebnisse der Größenausschlusschromatographie für eine
sehr niedrige Affinität zwischen IPSE und IgG und eine etwas höhere Affinität zwischen
IPSE und IgE. Die moderate Linksverschiebung des IgE-Peaks nach Interaktion mit IPSE
spricht gegen die Bildung großer Aggregate und damit gegen eine Quervernetzung von IgE.
Vielmehr dürfte es sich dabei um Anlagerung von einem oder mehreren Molekülen IPSE an
ein IgE-Molekül handeln. Diese Annahme wird unterstützt durch die Zunahme der
Linksverschiebung des IgE-Peaks im IPSE-Überschuss bzw. durch deren Abnahme im IgE-
Überschuss. Während der Inkubationszeit konnten eine Präzipitatbildung und somit die
Bildung von großen Komplexen nicht beobachtet werden. Bei der Untersuchung der
Interaktion zwischen IgG und Protein L waren dagegen deutlich sichtbare Präzipitate zu
beobachten.
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