Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

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Ergebnisse 4.5.3 Untersuchung der Komplexbildung von monomerem IgE und HEK-IPSE in Lösung mittels Superdex 200 PC 3.2/30 Wie in Abbildung 4.9 B zu erkennen ist, zeigt IgE (blaue Kurve) eine Eigenaggregation. Um eine Bindung von HEK-IPSE mit schon vorher aggregiertem IgE auszuschließen, wurde für die Untersuchung der Komplexbildung in Lösung versucht reines monomeres IgE zu erhalten. Dafür wurden große Mengen von IgE mit der Superdex 200 10/300 GL aufgetrennt und die Fraktionen, die vermutlich nur monomeres IgE enthielten gesammelt (hier Fraktionen B7 und B8), eingeengt und zur Überprüfung über die Superdex 200 PC 3.2/30 gegeben (s. Abbildung 4.12 A). Es wurde hier mit der kleinen Säule gearbeitet, da nur geringe Mengen von dem monomeren IgE vorhanden waren. Es zeigte sich, dass das aggregierte IgE von dem nichtaggregiertem IgE abgetrennt werden konnte und reines monomeres IgE zur Verfügung stand. Im Laufe der Zeit trat aber wieder ein kleiner Peak vor dem Hauptpeak auf (s. Abbildung 4.12 B), was bedeutet, dass wieder eine leichte Eigenaggregation von IgE stattgefunden hat. A) B) Abbildung 4.12: Proteinprofile von monomerem IgE. Nicht-aggregiertes (monomeres) IgE wurde von aggregiertem IgE abgetrennt A) Proteinprofil von monomerem IgE nach einem Tag. B) Vergleich der Proteinprofile von monomerem IgE nach einem Tag ( blaue Kurve) und nach 5 Tagen (braune Kurve). In diesem Versuch wurden erneut IgE und HEK-IPSE in einem 1:1- und 1:4-Verhältnis gemischt und mittels der Superdex 200 PC 3.2/30 untersucht (s. Abbildung 4.13). Da mit kleinen Mengen gearbeitet wurde, war es hier nicht möglich die Fraktionen in einem Silbergel zu untersuchen. 64
Ergebnisse A) B) C) D) E) F) Abbildung 4.13: Untersuchung der Komplexbildung von monomerem IgE und HEK-IPSE in Lösung mittels Superdex 200. Monomeres IgE und HEK-IPSE wurden in Lösung 1:1 und 1:4 miteinander vermischt und nachträglich über eine Superdex 200-Säule aufgetrennt. A) Markerlauf. B) Proteinprofile von IgE (blaue Kurve) und HEK-IPSE (grüne Kurve) einzeln aufgetrennt im 1:1-Verhältnis. C) Proteinprofil von der Auftrennung des 1:1-Gemisches (rote Kurve) im Vergleich zu den Einzelmolekülen. D) Proteinprofil von IgE (blaue Kurve) und HEK-IPSE (grüne Kurve) einzeln aufgetrennt im 1:4-Verhältnis. E) Proteinprofil von der Auftrennung des 1:4-Gemisches (braune Kurve) im Vergleich im Vergleich zu den Einzelmolekülen. F) Vergleich der Auftrennung des 1:1-Gemisches (rote Kurve) zu der Auftrennung des 1:4-Gemisches (braune Kurve) und den Einzelmolekülen. 65
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Aus dem Forschungszentrum Borstel L
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Zusammenfassung Zusammenfassung Die
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