Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
4.5.3 Untersuchung der Komplexbildung von monomerem IgE und HEK-IPSE
in Lösung mittels Superdex 200 PC 3.2/30
Wie in Abbildung 4.9 B zu erkennen ist, zeigt IgE (blaue Kurve) eine Eigenaggregation. Um
eine Bindung von HEK-IPSE mit schon vorher aggregiertem IgE auszuschließen, wurde für
die Untersuchung der Komplexbildung in Lösung versucht reines monomeres IgE zu erhalten.
Dafür wurden große Mengen von IgE mit der Superdex 200 10/300 GL aufgetrennt und die
Fraktionen, die vermutlich nur monomeres IgE enthielten gesammelt (hier Fraktionen B7 und
B8), eingeengt und zur Überprüfung über die Superdex 200 PC 3.2/30 gegeben (s. Abbildung
4.12 A). Es wurde hier mit der kleinen Säule gearbeitet, da nur geringe Mengen von dem
monomeren IgE vorhanden waren. Es zeigte sich, dass das aggregierte IgE von dem nichtaggregiertem
IgE abgetrennt werden konnte und reines monomeres IgE zur Verfügung stand.
Im Laufe der Zeit trat aber wieder ein kleiner Peak vor dem Hauptpeak auf (s. Abbildung 4.12
B), was bedeutet, dass wieder eine leichte Eigenaggregation von IgE stattgefunden hat.
A) B)
Abbildung 4.12: Proteinprofile von monomerem IgE. Nicht-aggregiertes (monomeres) IgE wurde von
aggregiertem IgE abgetrennt A) Proteinprofil von monomerem IgE nach einem Tag. B) Vergleich der
Proteinprofile von monomerem IgE nach einem Tag ( blaue Kurve) und nach 5 Tagen (braune Kurve).
In diesem Versuch wurden erneut IgE und HEK-IPSE in einem 1:1- und 1:4-Verhältnis
gemischt und mittels der Superdex 200 PC 3.2/30 untersucht (s. Abbildung 4.13). Da mit
kleinen Mengen gearbeitet wurde, war es hier nicht möglich die Fraktionen in einem Silbergel
zu untersuchen.
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