Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

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Ergebnisse A) B) C) D) E) Abbildung 4.9: Untersuchung der Komplexbildung von IgE und HEK-IPSE in Lösung mittels Superdex 200. IgE und HEK-IPSE wurden im Verhältnis 1:1, 1:4 und 2:1 miteinander inkubiert und anschließend über eine Superdex 200-Säule aufgetrennt. A) Markerlauf. B) Proteinprofile von IgE (blaue Kurve) und HEK-IPSE (grüne Kurve) einzeln aufgetrennt C) Proteinprofil von der Auftrennung des 1:1-Gemisch (rote Kurve) im Vergleich zu den Einzelmolekülen. D) Proteinprofil von der Auftrennung des 1:4-Gemisches (braune Kurve) im Vergleich zum 1:1-Gemisch (rote Kurve) und den Einzelmolekülen. E) Proteinprofil von der Auftrennung des 2:1-Gemisches (graue Kurve) im Vergleich zum 1:1- und 1:4-Gemisch (rote und braune Kurve) und den Einzelmolekülen 60
Ergebnisse Abbildung 4.10 zeigt die Untersuchung der Fraktionen der einzelnen IgE / HEK-IPSE- Gemische (1:1, 1:4, 2:1) in silbergefärbten SDS-Gelen. Bild A zeigt die Untersuchung des 1:1-Gemisches. Es ist zu erkennen, dass HEK-IPSE zusammen mit IgE in den Fraktionen B1 – B8 enthalten ist (IgE bei ca. 200 kDa und HEK-IPSE bei ca. 45 kDa) und somit eine Bindung, wie schon aus dem Proteinprofil (Abbildung 4.9) vermutet, bestätigt ist. Zusätzlich sind aber auch immer noch Banden von HEK-IPSE in den hinteren Fraktionen (B9 – B14) zu erkennen, was auf einen Rest von nichtgebundenen HEK-IPSE-Molekülen schließen lässt. Weiterhin sieht man aber auch in diesen Fraktionen noch schwach angefärbte Banden von IgE. Dies ist vermutlich wieder durch Interaktionen mit der Säulenmatrix zu erklären, wobei wenig IgE durch unspezifische Bindungen zurückgehalten wird und später zusammen mit HEK-IPSE von der Säule gespült wird. Bild B zeigt die Untersuchung des 1:4-Gemisches. Auch hier ist wieder die Bindung von HEK-IPSE an IgE bestätigt, beide Moleküle sind in den Fraktionen B1 – B8 enthalten. Die kräftigere Bandenfärbung spricht dafür, dass etwas mehr HEK-IPSE an IgE gebunden hat. Besonders in den Fraktionen B4 und B5 ist die Anfärbung am stärksten, was darauf hindeutet, dass in diesem Bereich das meiste HEK-IPSE gebunden hat. Daneben sind in den Fraktionen B11-B15, d.h. im Bereich des HEK-IPSE-Monomers, in Übereinstimmung mit dem Proteinprofil sehr kräftige HEK-IPSE Banden zu sehen. Zusätzlich treten in diesem Bereich auch wieder schwach angefärbte IgE-Banden auf. Bild C zeigt die Untersuchung des 2:1-Gemisches. Hier sind ebenfalls wieder die Banden von HEK- IPSE zusammen mit den IgE-Banden zu sehen, wobei hier die HEK-IPSE-Banden schwächer angefärbt sind, was auf die weniger eingesetzte Menge zurückzuführen ist. Obwohl IgE hier im 2:1-Verhältnis eingesetzt wurde, ist immer noch ungebundenes HEK-IPSE in den hinteren Fraktionen zu erkennen, besonders in Fraktion C2. 61
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