Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
4.5.2 Untersuchung der Komplexbildung von IgE und HEK-IPSE in Lösung
mittels Superdex 200 10/300 GL
IgE und HEK-IPSE wurden in einem 1:1-, 1:4- und 2:1-Verhältnis miteinander vermischt und
jeweils für 30 min bei Raumtemperatur inkubiert. Nachträglich wurde das jeweilige Gemisch
mit der Superdex 200 10/300 GL aufgetrennt (s. 3.9.1.1). Während der Inkubation sind keine
Präzipitate aufgetreten, die auf eine Bildung von großen Komplexen hindeuten könnten.
Abbildung 4.9 B zeigt die Auftrennung der Einzelmoleküle im 1:1-Verhältnis nebeneinander
aufgetragen. IgE mit ca. 180 kDa kommt wieder als erstes von der Säule (blaue Kurve).
Neben dem IgE-Hauptpeak (Fraktion B5 – B8) sind, wie bei IgG, noch zwei kleinere Peaks
bei den Fraktionen A15 – B4 zu erkennen, die ebenfalls auf aggregiertes IgE hindeuten. Das
kleinere Molekül HEK-IPSE kommt, wie erwartet, später von der Säule (grüne Kurve). Bild
C in Abbildung 4.9 zeigt die Auftrennung des IgE / HEK-IPSE-Gemisches im 1:1-Verhältnis
(rote Kurve) im Vergleich zu den einzelnen Molekülen. Hier ist nun deutlich eine Bindung zu
erkennen, im Gegensatz zu IgG und HEK-IPSE. Der IgE-Hauptpeak wird kleiner, während
die Peaks der IgE-Aggregate davor größer und einheitlicher werden. Insgesamt wird der
ganze IgE-Peak breiter, die Trennung zwischen den IgE-Aggregaten und dem monomeren
IgE geht zum Teil verloren. Gleichzeitig ist eine kleine Linksverschiebung des „Monomer-
Peaks“ in einen höheren Molekularbereich zu erkennen. Zusätzlich fällt auf, dass der Peak
von HEK-IPSE fast verschwunden ist. Abbildung 4.9 D zeigt zusätzlich das Proteinprofil
nach der Auftrennung von IgE und HEK-IPSE im 1:4-Verhältnis (braune Kurve). Die
Linksverschiebung des „Monomer-Peaks“ hat zugenommen, was auf eine weitere Bindung
von HEK-IPSE an IgE hindeuten könnte. Die Höhe des Peaks hat sich aber nicht wesentlich
verändert. Die Peaks der Aggregate sind im Wesentlichen gleich geblieben. Weiterhin ist
unter diesen Bedingungen erwartungsgemäß reichlich ungebundenes HEK-IPSE zu sehen
Abbildung 4.9E zeigt das Proteinprofil nach der Auftrennung von IgE und HEK-IPSE im 2:1-
Verhältnis (graue Kurve) im Vergleich zu den anderen beiden Kurven (1:1 und 1:4). Die
Linksverschiebung des „Monomer-Peaks“ von IgE nimmt hier wieder deutlich ab.
Gleichzeitig werden die IgE-Aggregate kleiner und der Peak von HEK-IPSE ist
verschwunden. Dies und die Verschiebung zurück nach rechts, deuten daraufhin, dass HEK-
IPSE gebunden hat, aber noch ungebundenes IgE weiterhin vorliegt.
59