Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
In der Untersuchung der einzelnen Fraktionen in der SDS-PAGE mit nachträglicher
Silberfärbung (Bild D) zeigte sich, wie schon nach dem Ergebnis des Säulenlaufes vermutet,
das kein HEK-IPSE zusammen mit IgG in den Fraktionen B2 – B11 enthalten ist. Es sind nur
die Banden von IgG im oberen Bereich des Trenngeles sichtbar. In den Fraktionen B12 – C2
sind die Banden des glykosylierten HEK-IPSE, das hier ungebunden vorliegt, in ihren
unterschiedlichen Größen aufgetrennt zu sehen. Ganz schwach zeigen sich hier auch Banden
von IgG. Dies ist vermutlich durch Interaktionen mit der Matrix der Säule zu erklären, wobei
wenig IgG erst später, zusammen mit HEK-IPSE, von der Säule gespült wird. Es deutet nicht
auf eine Bindung von IgG und HEK-IPSE hin, da die sonst entstandenen größeren Komplexe
als erstes von der Säule hätten kommen müssen (s. 3.9).
Da bekannt ist, dass das B-Zell-Superantigen Protein L mit hoher Affinität an alle humanen
Immunglobulinklassen bindet und dieses Molekül auch erfolgreich in
Gelpräzipiationsversuchen in der Arbeit von Silke Blindow (2004) und Maren Wodrich
(2006) als Positivkontrollen mit IgG eingesetzt wurde, wurde hier zusätzlich die Bindung von
Protein L und IgG in Lösung als Kontrollversuch untersucht, um mögliche Bildungen von
großen Komplexen vergleichen zu können. Protein L besitzt eine ähnliche molekulare Größe
(38,5 kDa) wie HEK-IPSE (34 – 39 kDa). IgG und Protein L wurden in einem 1:1-Verhältnis
miteinander vermischt und 30 min inkubiert. Während der Inkubation traten nach kurzer Zeit
Präzipitate von großen Komplexen auf, die vor dem Auftragen der Säule abzentrifugiert
wurden. Solche Präzipitate waren mit IgG und HEK-IPSE nicht sichtbar. In Abbildung 4.8 B)
sind die Proteinprofile von IgG (blaue Kurve) und Protein L (braune Kurve) getrennt
nebeneinander aufgezeichnet und zusätzlich das Proteinprofil von der Auftrennung des
Gemisches (rote Kurve). Im Gegensatz zu IgG und HEK-IPSE ist eine Bindung von IgG und
Protein L erkennbar. Der IgG-Peak ist kleiner geworden, von ca. 140 mAUs auf ca. 70 mAUs,
und ein Anstieg der Peaks im Bereich der aggregierten IgG-Moleküle (Fraktionen B2 – B8)
ist zu sehen. Die Bildung von größeren Komplexen ist hier nicht sichtbar, da diese vorher
präzipitierten und abzentrifugiert wurden. Das Silbergel zur Untersuchung der Fraktionen von
der Auftrennung des IgG / Protein L-Gemisches (Bild B) zeigt Banden von Protein L
zusammen mit Banden von IgG in den Fraktionen B2 – B10, was eine Bindung beider
Moleküle bestätigt.
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