Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
weiten Bereich. Es ist kein großer Unterschied zwischen IgG ohne und mit Zusatz zu
erkennen. Am Boden der Auftragstasche von IgG, das mit den Reagenzien versetzt wurde,
findet sich vermutlich als Ausdruck von IgG-Komplexen eine zusätzliche Bande. Die Banden
des E. coli-IPSE-Dimers (32 kDa) (ohne Zusatz) sind gut zu erkennen. Zusätzlich zeigt sich
auch eine Bande im niedrigeren Molekularbereich, was höchstwahrscheinlich monomeres E.
coli-IPSE (16 kDa) darstellt. Daneben ist aber bei 20µM und 30 µM (E. coli-IPSE ohne
Zusatz) deutlich eine Bande bei ungefähr 97 kDa zu erkennen. Diese entstand vermutlich
durch Verunreinigungen der Probe. Wird E. coli-IPSE mit den Reagenzien versetzt, zeigt sich
eine Abschwächung der Anfärbung der E. coli-IPSE-Banden, besonders deutlich bei 10 µM
E. coli-IPSE zu erkennen. Zusätzlich treten weitere Banden im Bereich von ca. 60 kDa und 70
kDa bei der eingesetzten Menge von 20 µM und 30 µM auf, und noch eine weitere Bande
verschwommen in der Höhe von IgG (also ca. 150 kDa) ebenfalls bei 30 µM. Diese Banden
lassen auf Aggregationen von E. coli-IPSE-Molekülen schließen, die auf Grund der
chemischen Quervernetzung nicht wieder durch SDS gelöst wurden. In Abbildung 4.5 B sind
die IgG / E. coli-IPSE-Gemische (1:1; 1:2; 1:3) mit und ohne Zusatz von EDC und Sulfo-
NHS aufgetragen. Trotz Zusatz der Reagenzien sind IgG und E. coli-IPSE noch deutlich
getrennt von einander zu sehen. Es ist auch kein Unterschied zwischen der Inkubation von 2
min und 15 min zu erkennen. Die Banden von E. coli-IPSE scheinen aber schwächer zu sein
im Vergleich zu der Bandenstärke ohne Zusatz der Reagenzien. Es könnte auf eine Bindung
an IgG hindeuten. Aber es treten keine weiteren Banden auf, die auf Komplexe zwischen den
beiden Molekülen schließen lassen. Wie bereits bei IgG mit Zusatz der quervernetzenden
Agenzien, zeigt sich auch hier wieder eine Proteinanfärbung in den Auftragstaschen des Gels
bei allen IgG / E. coli-IPSE-Verhältnissen. Diese könnten somit von IgG-Komplexen oder
von IgG / E. coli-IPSE-Komplexen stammen. Die zusätzlichen Banden, die bei E. coli-IPSE
alleine ohne IgG auftraten (im Bild A), sind unter diesen Umständen nicht zu erkennen. Die
schwächere Anfärbung der Banden könnte auch durch eine schlechtere Anfärbbarkeit der
Proteine, durch Zusatz der chemischen Reagenzien, herrühren. Es ist aber auffällig, dass nur
die Banden von E. coli-IPSE eine schwächere Färbung zeigen.
Zusammenfassend ist nach Zusatz der chemischen Crosslinker zwar eine mäßige Aggregation
von E. coli-IPSE alleine bzw. IgG alleine zu beobachten, nicht jedoch eine eindeutige
Komplexbildung zwischen beiden Molekülen.
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