Untersuchung eines neuartigen Mechanismus der Aktivierung ...

Ergebnisse
4.2.2 Quervernetzung von HEK-IPSE durch IgG
Da bei dem Versuch der Quervernetzung von E. coli-IPSE durch IgG die Negativkontrollen
mit TBST-Puffer durchweg ein positives Signal im Sinne einer Autoaggregation zeigten (s.
4.2.1), wurde dieser Versuch mit HEK-IPSE wiederholt (s. Abbildung 4.3). Dies erfolgte
speziell im Hinblick auf die Frage, ob HEK-IPSE als glykosyliertes Molekül im Gegensatz
zum nicht-glykosylierten E. coli-IPSE eine geringere oder fehlende Tendenz zur
Autoaggregation aufweist. Bei dieser Untersuchung wurde das biotinylierte HEK-IPSE in
geringerer Konzentration (7 pmol/ml) als das biotinylierte E. coli-IPSE eingesetzt, um eine
mögliche Eigenbindung, die schon mit E. coli-IPSE gezeigt wurde, zu verringern. Wie in
Abbildung 4.3 zu erkennen, kann auch hier deutlich eine Quervernetzung von HEK-IPSE
durch das IPSE-Antiserum gezeigt werden. Ebenso ist auch wieder eine Bindung durch IgG
sichtbar, wenn auch diesmal etwas schwächer als mit E. coli-IPSE zu sehen war (s. Abbildung
4.2), was am ehesten durch die geringere Menge des eingesetzten biotinyliertem HEK-IPSE
zu erklären ist. Aber auch in diesem Versuch trat wieder das Problem der positiven
Negativkontrolle auf, in der Intensität vergleichbar der Quervernetzung durch IgG.
Abbildung 4.3: Quervernetzung von HEK-IPSE durch IgG im Sandwich-Blot. HEK-IPSE wurde in einer
Konzentrationsreihe (pmol/Dot) auf die Nitrozellulosemembran gedottet. Erster Inkubationsschritt: IgG (62,5
pmol/ml; 125 pmol/ml; 250 pmol/ml; 500 pmol/ml), anti-IPSE-Antiserum (anti-IPSE) als Positivkontrolle oder
TBST-Puffer als Negativkontrolle bzw. SAVAP-Kontrolle. Zweiter Inkubationsschritt: biotinyliertes HEK-IPSE
(7 pmol/ml) oder TBST-Puffer (SAVAP-Kontrolle). Die Bindung wurde über SAVAP nachgewiesen.
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